HK21320-24S 结合态淀粉合成酶(GBSS)测试盒(紫外分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R3	粉剂×1 瓶	-20℃
试剂R4	粉剂×1 瓶	-20℃
试剂R5	粉剂×1 瓶	-20℃
试剂R6	粉剂×2支	-20℃
试剂R7	液体×2 支	-20℃
试剂R8	液体×1 支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约0.1g 组织加入1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL 提取液充分混匀，置冰上待测。

二、试剂准备

1、试剂R4：临用前每支加入5 mL 试剂R1。

2、试剂R5：临用前每支加入8 mL 试剂R1。

3、试剂R6：临用前取1 支加入208 μL 双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存。

4、试剂R8：每支临用前加入溶解好的4 mL 试剂R4。

5、反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂R2中加入7 mL 试剂R1，缓慢加热，逐渐升温至水沸腾使其溶解，冷却后加入试剂R3混合溶解，这样可以分两批配制并且测定。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、在EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称(uL)	测定管
样本	200
反应液Ⅰ	270
混匀，30℃保温20min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却
试剂R8	150
混匀，30℃保温30min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g常温离心10min，取上清液（如果一次性测定样本较多，可以将试剂R4、R5和R6按比例配成混合液）
上清液	450
试剂R5	300
试剂R6	15
试剂R7	15