HK21318-48S 果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)测试盒(紫外分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21318-48S

Chemical Name

HK21318-48S 果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)测试盒(紫外分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP，EC2.7.1.90）是一种胞质酶，广泛存在于植物组织中，与磷酸果糖激酶一样催化果糖-6-磷酸的磷酸化，单PEP 催化反应为可逆反应，并以焦磷酸代替ATP，在光合作用碳代谢中起重要作用。

测定原理：

PFP 催化6-磷酸果糖转化为1,6-二磷酸果糖，它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为磷酸二羟丙酮，再由α-磷酸甘油脱氢酶和NADH 催化生成3-二磷酸甘油和NAD，340nm 处的吸光度变化反映了PFP 的活性的高低。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1 g，加入1 mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，20000g 离心15min，取上清置冰上待测；

2、细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1 mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 s，间隔7 s，总时间3 min）；然后4℃，20000g 离心15min，取上清置冰上待测；

3、液体：直接检测。

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前加6 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。

2、试剂R3：临用前加6 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。

3、试剂R4：临用前取1 支加入0.3mL 蒸馏水溶解，4℃保存一周。（1 支溶解后可做100T，为了延长使用时间，此产品多给1 支粉剂）

4、试剂R5：临用前加入0.3 mL 蒸馏水溶解，-20℃分装保存两周，禁止反复冻融。

5、试剂R6：临用前加入0.6 mL 蒸馏水溶解，4℃保存一周，也可按比例现用现配。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30 min 以上，调节波长至340 nm，蒸馏水调零。

2、操作表：

试剂名称(uL)	测定管	空白管
试剂R1	670	670
试剂R2	100	100
试剂R3	100	100
试剂R4	10	10
试剂R5	10	10
试剂R6	10	10
样本	100	-
蒸馏水	-	100
充分混匀后于1mL石英比色皿中测定37℃条件下，340 nm 处初始值A1 和30 min 的吸光值A2，分别记为A1 测定管、A1 空白管、A2 测定管，A2 空白管。计算 ΔA= （A1 测定管-A2 测定管）-（A1 空白管-A2空白管）。注：也可将试剂R1、R2、R3、R4、R5、R6按操作表比例，配制成工作液，现配现用；空白管只需做1-2 次。