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Cat. Number

HK21316-24S

Chemical Name

HK21316-24S 碱性木聚糖酶(BAX)测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，碱性木聚糖酶（BAX）一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。

测定原理：

BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算BAX活力。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器、蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
缓冲液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1支	2-8℃

实验步骤:

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1. 细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎，(冰浴，功率200W，超声开3秒，关10秒，重复30次)；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织的处理：称取约0.1g 组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。8000g，4℃下离心10min，取上清，置冰上待测。

3. 血清(浆）的处理：吸取0.1mL血清（浆)，加入0.9mL提取液，冰浴中匀浆。8000g，4℃下离心10mir取上清，置冰上待测。

二、试剂准备

1. 标准品: 10mg木糖。临用前加入667uL蒸馏水配制成100umol/mL 的木糖标准液，2-8°C保存两周。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，用蒸馏水调零。

2、标准溶液的制备：取20uL 100umol/mL的木糖标准液，加入980uL蒸馏水，充分混匀，配制成2umol/mL的标准

溶液使用，现用现配。(实验中每管需要60uL，为减小实验误差，故配制大体积)。

3、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：

试剂名称	对照管	测定管	空白管	标准管
样本	200	200	-	-
标准液	-	-	-	200
蒸馏水	-	-	200	-
缓冲液	300	300	300	300
试剂R1	-	200	200	200
涡旋混匀，置于50℃水浴锅中反应30min，立即沸水浴中10min灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系)
试剂R1	200	-	-	-
试剂R2	300	300	300	300
涡旋混匀，沸水浴中准确显色5min(注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，冷却至室温后，吸取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿中，尽快测定各管540nm下的吸光度，分别记为A对照、A测定、A空白、A标准。计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准曲线只需测1-2次。每个测定管需设一个对照管。