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| Cat. Number | HK21315-48S |
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| Chemical Name | HK21315-48S 碱性蛋白酶(AKP)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 碱性蛋白酶AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。 测定原理： 在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm 有特征吸收峰，测定680nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。 需要的仪器，耗材: 1、可见分光光度计/酶标仪 2、台式离心机 3、可调式移液器 4、微量玻璃比色皿/96孔板 5、研钵、冰和蒸馏水。 6、研钵/匀浆器 7、水浴锅 8、磁力搅拌器 9、1.5 mL EP 管 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（具体比例可以参考文献） 称约0.1g 组织，加入1mL 提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g 酶制品，加入1mL 提取液，置冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R1：临用前加入4mL 蒸馏水，充分溶解； 2、试剂R2：临用前加入4mL 提取液，沸水浴中搅拌溶解。 3、标准品：20μmol/mL 标准酪氨酸。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。 2、试剂R1、试剂R2和试剂R3置于40℃水浴保温30min以上。 3、标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL标准溶液使用，现用现配。 4、样本测定 1.5mLEP管中分别加入下列试剂：
取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板中，于680nm测定光吸收，分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。并计算ΔA测定=A测定管-A对照管、ΔA标准=A标准管-A空白管。 四、碱性蛋白酶活性计算 1、按样本蛋白浓度计算 酶活单位定义：40℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。 AKP 活性（U/mg prot）=C 标准品×ΔA 测定÷ΔA 标准×V1÷（Cpr×V2）÷T 2、按样本质量计算 酶活单位定义：40℃每克样本每分钟催化水解产生1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。 AKP 活性（U/g 质量）=C 标准品×ΔA 测定÷ΔA 标准×V1÷（W×V2÷V3）÷T C 标准品：标准酪氨酸溶液浓度； Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； V1：酶促反应总体积； V2：加入反应体系中粗酶液体积； V3：粗酶液总体积； T：催化反应时间，10min。 注意事项： 若反应较弱，（A 测定管-A 对照管）差值较小，可适当延长反应时间（20-30min），即第一步水浴时间，最后计算酶活时对公式进行修改。 本试剂盒仅供科研使用! |
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