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| Cat. Number | HK21283-48S |
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| Chemical Name | HK21283-48S 果糖-1,6-二磷酸(FDP)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 果糖1,6-二磷酸（fructose-1,6-diphosphate, FDP）是糖酵解过程中的一种重要的中间产物，对多种酶具有调节作用，具有改善细胞能量代谢、增加能量利用、抗心律失常及抗组织过氧化等作用，广泛应用于临床医药。 测定原理： 醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸裂解，产物与2,4-二硝基苯肼在酸性介质中反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色，在540nm 处有特征吸收峰。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照质量（g）：提取液1体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液1）加入提取液1，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液2，4℃，12000g离心10min后取上清待测。 2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液1体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液1）加入提取液1，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液2，4℃，12000g离心10min后取上清待测。 3. 血清（浆）：取100μL血清（浆）加入1mL提取液1，4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液2，4℃，12000g离心10min后取上清待测。 二、试剂准备 1、试剂2：临用前加入0.3mL 蒸馏水，充分溶解后待用，用不完的试剂4℃保存，4℃保存一周； 2、标准品：临用前加入1176 μL 蒸馏水充分溶解，配制成50 μmol/mL 果糖-1,6-二磷酸标准溶液。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。 2、将50μmol/mL的果糖-1,6-二磷酸标准液用蒸馏水倍比稀释为3.125、1.5625、0.78125、0.39、0.2、0.1 μmol/mL的标准溶液备用。 3、样本测定：(在1.5 mL离心管或96孔板中操作)
四、FDA 含量计算 1、标准曲线的绘制： 以各个标准溶液的浓度为x 轴，其对应的ΔA 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y= kx+b，将ΔA 带入方程得到x（μmol/mL）。 2、FDP 含量的计算： （1）按样本质量计算 FDP 含量（μg/g 质量）=x×(V 上清+V 提取液2)×M÷(W×V 上清÷V 提取液1) （2）按细胞数量计算 FDP 含量（μg/104 cell）=x×(V 上清+V 提取液2)×M÷(V 上清÷V 提取液1×细胞数量(万个)) （3）按液体体积计算 FDP含量（μmol/mL）=x×（V上清+V提取液2）÷ [V液体×V上清÷（V提取液1+V液体）] V 上清：提取时上清液体积； V 提取液2：提取液2的体积； V 提取液1：提取液1的体积； W：样本质量，g； M：果糖-1,6-二磷酸分子质量，340； V 液体：液体样本体积。 注意事项： 当ΔA测定大于0.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。 本试剂盒仅供科研使用! |
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