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Cat. Number

HK21280-48S

Chemical Name

HK21280-48S 果胶酶测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

果胶酶（pectinase）是分解果胶的酶类，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于高等植物果实和微生物中，是水果加工中最重要的酶。

测定原理：

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS 试剂反应生成在540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

2、菌类：按照细菌数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3、液体：直接检测。

二试剂准备

1、试剂R1：若溶液中有不溶解物质，可以50℃水浴溶解。

2、标准品：10mg 半乳糖醛酸。临用前加入0.943mL 蒸馏水，配成50μmol/mL 的标准液。

三、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、将50μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为10、8、6、4、2、1 μmol/mL 的标准溶液备用。

3、取40μL 样本沸水浴10min 备用。

4、样本测定（在1.5mL离心管中）：

试剂名称(uL)	对照管	测定管	标准管	空白管
试剂R1	200	200	200	200
50℃水浴温育5min
标准溶液	-	-	40	-
样本	-	40	-	-
蒸馏水	-	-	-	40
煮沸样本	40	-	-	-
混匀，50℃水浴反应30min，马上沸水浴5min，冷却后8000g，常温离心10min，取上清。
上清液	150	150	150	150
试剂R2	150	150	150	150
沸水浴5min，冰浴冷却终止反应，吸取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中测定540nm处吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。