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| Cat. Number | HK21279-24S |
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| Chemical Name | HK21279-24S 果胶酶测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/24S |
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| References | 果胶酶（pectinase）是分解果胶的酶类，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于高等植物果实和微生物中，是水果加工中最重要的酶。 测定原理： 果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS 试剂反应生成在540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 2、菌类：按照细菌数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3、液体：直接检测。 二试剂准备 1、试剂R1：若溶液中有不溶解物质，可以50℃水浴溶解。 2、标准品：10mg 半乳糖醛酸。临用前加入0.943mL 蒸馏水，配成50μmol/mL 的标准液。 三、测定步骤 1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。 2、将50μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为6、5、4、2、1 μmol/mL的标准溶液备用。 3、取125μL 样本沸水浴10min 备用。 4、样本测定（在1.5mL离心管中）：
四、果胶酶活性计算 1、标准曲线的绘制： 以各个标准溶液的浓度为x 轴，其对应的ΔA 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA 带入方程得到x（μmol/mL）。 2、果胶酶活性的计算： （1）按蛋白浓度计算 酶活定义：在50℃，pH3.5 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生1μmol 半乳糖醛酸为1 个酶活力单位。 果胶酶活性（U/mg prot）=x×V 提取÷（V 提取×Cpr）÷T （2）按样本质量计算 酶活定义：在50℃，pH3.5 条件下，每克样本每小时分解果胶产生1μmol 半乳糖醛酸为1 个酶活力单位。 果胶酶活性（U/g 质量）= x×V 提取÷W÷T （3）按照细菌数量计算 酶活定义：在50℃，pH3.5 条件下，每104个细菌每小时分解果胶产生1μmol 半乳糖醛酸为1 个酶活力单位。 果胶酶活性（U/104 cell）= x×V 提取÷T÷细菌数量（万个） （4）按液体体积计算 酶活定义：在50℃，pH3.5 条件下，每mL 样本每小时分解果胶产生1μmol 半乳糖醛酸为1 个酶活力单位。 果胶酶活性（U/mL）= x×V 样÷V 样÷T V 提取：提取液体积； V 样：加入的样本体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； T：反应时间，0.5h。 注意事项： 1、A 大于1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。 2、植物果实组织建议将样本用提取液稀释10 倍或20 倍后再测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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下一个：果胶酶测试盒(酶标板法)上一个：果胶裂解酶测试盒(酶标板法) |
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