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Cat. Number

HK21277-48S

Chemical Name

HK21277-48S 果胶裂解酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

果胶裂解酶（EC.4.2.2.10）是果胶酶的重要组成部分，催化果胶分子链的消除裂解。来源比较广泛，主要来源于微生物，在食品加工工业中提高果汁产量方面有重要意义，在减少环境污染和降低能源消耗方面也具有潜在的应用价值。

检测原理：

果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4 糖苷键，生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，在235nm处有特征吸收峰，测定235nm下吸光度的上升来表示果胶裂解酶的活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、恒温水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2．细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 培养液：直接测定。

二、试剂准备

试剂R1：溶液中如果有沉淀存在，可以50℃水浴助溶。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至235nm，蒸馏水调零。

2、操作表：(1.5mL离心管中)

试剂名称(uL)	测定管	空白管
试剂R1	900	900
酶液	100	-
蒸馏水	-	100
充分混匀后测定235nm下的初始值A1，40℃反应30min 后再次测定吸光值A2，计算ΔA 测定管=A2 测定管-A1 测定管，ΔA 空白管= A2 空白管-A1 空白管，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管。

四、果胶裂解酶活性计算

1. 按照蛋白浓度计算

酶活性定义：在40℃，pH5.5 条件下，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹÷（V 样×Cpr）÷T

2. 按照样本质量计算

酶活性定义：在40℃，pH5.5 条件下，每克组织每分钟分解果胶产生1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹÷（V 样×W÷V 样总）÷T

3. 按照细菌、真菌数量计算

酶活性定义：在40℃，pH5.5 条件下，每10⁴个细胞每分钟分解果胶产生1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性（U/104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T

4. 按照培养液体积计算

酶活性定义：在40℃，pH5.5 条件下，每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。