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Cat. Number
HK21275-48S
Chemical Name
HK21275-48S 总果胶含量测试盒(可见分光光度法)
Qty 1
50T/48S
References

果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶(原果胶或碱溶性果胶)。果胶是一种天然高分子化合物,具有良好的胶凝化和乳化稳定作用,已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。


测定原理:

原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,与原有的可溶性果胶进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530nm处有特征吸收峰。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
提取液1液体×1 瓶2-8℃
提取液2液体×1 瓶2-8℃
试剂R1液体×1 瓶(自备)2-8℃
试剂R2液体×1 瓶2-8℃
试剂R3液体×1 瓶2-8℃
标准品粉剂×1 支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

将组织样本捣碎,按照样本质量(g)和提取液1体积(mL)为1: 20 的比列(建议取约0.05g 样本,加入1mL 提取液1),置于90℃恒温水浴锅中浸提30min,取出冷却后于5000g、25℃离心10min,去掉上清,沉淀中再加入1mL提取液1重复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入1mL 提取液2,置于90℃恒温水浴锅中水解1h,取出冷却后于8000g、25℃离心15min,取上清液待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。

2. 标准品的制备:将50μmol/mL标准液用提取液2稀释1.5、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表:

试剂名称(uL)空白管标准管对照管测定管
样本--100100
标准品-100--
蒸馏水100---
试剂R1800800800800
混匀、90℃放置10min,取出后冷却
试剂R2--100-
试剂R3100100-100
混匀,25℃静置30min后测定530nm处吸光值,分别记为A空白管、A 标准管、A 对照管和A 测定管。ΔA 标准=A 标准管-A 空白管,ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。

四、总果胶含量的计算

1. 标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到x(μmol/mL)。

2. 总果胶含量的计算:

总果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液2÷W

V提取液2:加入提取液2的体积;

W:样本质量,g。


注意事项:

1.浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热、冷却后再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。

2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。


本试剂盒仅供科研使用!

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