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| Cat. Number | HK21263-96S |
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| Chemical Name | HK21263-96S 谷氨酰胺酶(GLS)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 谷氨酰胺酶GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
利用靛酚蓝比色法测定GLS 催化谷氨酰胺生成的氨，在630nm处检测，来计算其酶活性。 需自备的仪器和用品： 台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，12000g 离心15 min，取上清置于冰上待测。 2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万个细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。 二、试剂准备 1、提取液：使用前37℃预热； 2、试剂R1：临用前加入5 mL 提取液充分溶解待用； 3、试剂R2B：临用前将试剂R2A 倒入试剂R2B 中混匀（A:B=1：4 比例），或者根据样本所需，按照体积比试剂R2A：试剂R2B=1:4 现配现用； 4、标准品：10 μmol/mL 氮标准液，使用前37℃预热。 三、测定步骤 1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零。 2. 标准液的制备：将标准溶液用提取液稀释8倍得1.25μmol/mL的标准溶液。 3. 样本测定：
混匀，室温放置30min，630nm 处读取吸光值A，分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 四、GLS 酶活性计算 1、按样本蛋白浓度计算 单位定义：37℃下每mg 蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。 GLS（U/mg prot）=ΔA÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 酶促÷(V 样本×Cpr)÷T 2、按样本质量计算 单位定义：37℃下每g 组织每小时催化谷氨酰胺生成1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。 GLS（U/g 质量）=ΔA÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 酶促÷(W÷V 提取×V 样本)÷T 3、按细胞数量计算 单位定义：37℃下每500 万个细胞每小时催化谷氨酰胺生成1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。 GLS（U/104 cell）=ΔA÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 酶促÷(V 样本÷V 提取)÷T C 标准：标准液浓度； V 酶促:酶促反应体积； V 提取：加入提取液体积； V样本：上清液体积； T：反应时间，1h； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g。 注意事项： 1、当测定吸光值大于0.8 时，建议将上清液用提取液进一步稀释后测量，计算时乘以稀释倍数。 2、试剂R2配置后尽快使用，若发现变色则不能再用。 本试剂盒仅供科研使用! |
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