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| Cat. Number | HK21255-96S |
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| Chemical Name | HK21255-96S 谷氨酸(Glu)含量测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 谷氨酸Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。 测定原理： 谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，引起340nm处吸光度的上升，通过测定340nm吸光度的变化，计算谷氨酸含量。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 细菌、细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000 万细菌或细胞加入1mL 试剂R1，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30 次），10000rpm，常温离心10min，取上清待测。 组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1进行冰浴匀浆，10000rpm，常温离心10min，取上清待测。 二、试剂准备 1、试剂R3：临用前加入20 mL 试剂R1； 2、试剂R4：临用前加入1.5 mL 试剂R2； 3、标准液：10 μmol/mL 谷氨酸标准品。 三、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2. 标准溶液的制备：将标准品分别稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的标准溶液。 3. 操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入：
四、谷氨酸含量计算 1. 标准曲线的绘制： 以谷氨酸含量（μmol/mL）为x轴，标准管ΔA为y轴，绘制标准曲线y=kx+b。将测定管ΔA带入方程得到x值（μmol/mL）。 2. 谷氨酸含量计算： （1）按照蛋白浓度计算： 谷氨酸含量（μmol/mg prot）=x×V样本÷（Cpr×V样本） （2）按照样本质量计算： 谷氨酸含量（μmol/g 质量）=x×V样本÷（W÷V样总×V样本） （3）按照细菌或细胞数量计算： 谷氨酸含量（μmol/104 cell）=x×V样本÷（1000÷V样总×V样本） V样总：加入提取液体积； V样本：加入的样本体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 1000：细菌或细胞总数，1000万。 注意事项： 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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