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| Cat. Number | HK21251-96S |
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| Chemical Name | HK21251-96S 甘油三酯(TG)含量测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 甘油三酯TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。
用异丙醇抽提取甘油三酯TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在420 nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG含量成正比。 可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、正庚烷、异丙醇、蒸馏水、玻璃空瓶。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、组织：按照组织质量（g）：试剂R1体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂R1）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清待测。 2、细胞、细菌：先收集400-500 万细胞或细菌到离心管内，离心弃上清，加1mL 试剂R1，超声波破碎1min（强度20%，超声2s，停1s），8000g，4℃离心10min，取上清待测。 3、血清（浆）等液体样本：直接测定。 二、试剂准备 1、试剂R1：自备玻璃空瓶，正庚烷和异丙醇按体积比1:1 混合，盖紧后混匀； 2、标准品：临用前加5 mL 试剂R1，即1 mg/mL 甘油三酯标准溶液，4℃保存。 三、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到420 nm，蒸馏水调零。 2. 水浴锅预热到65℃。
加试剂R1后充分混匀，再加试剂R2，剧烈振荡30s，静置3-5min 后再剧烈震荡30s，如此反复3 次，常温静置一定时间分层后取上层溶液30μL，置于新的EP 管中。 3．甘油三酯含量测定：
冷却后吸取200μL至微量玻璃比色皿/96 孔板测定420nm处吸光度，记为A空，A标和A测。（空白管和标准管需检测1-2 次。） 四、TG 计算公式 1. 血清（浆）中甘油三酯含量： TG 含量（mg/dL）=C 标准品×（A 测-A 空）÷（A 标-A 空）×100 C 标准品：标准品浓度； 100：单位换算系数。 2. 组织中甘油三酯含量： (1)按样本蛋白浓度计算 TG 含量（mg/ mg prot）=C 标准品×V×（A 测-A 空）÷（A 标-A 空）÷（Cpr×V） (2)按样本质量计算 TG 含量（mg/ g 质量）=C 标准品×V×（A 测-A 空）÷（A 标-A 空）÷W C 标准品：标准品浓度； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； V：加入试剂R1的体积。 3. 细胞、细菌中甘油三酯含量： TG 含量（mg/104 cell）=C 标准品×（A 测-A 空）÷（A 标-A 空）÷细菌或细胞密度 C 标准品：标准品浓度； 细菌或细胞密度：104 cell/mL。 注意事项： 1. 试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩，试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。 2. 加试剂二后需反复剧烈振荡，使待测液中甘油三酯得到充分提取，振荡幅度、时间、反复次数以及等待分层 时间均应保证一致。 3. 为保证试验的重复性，每次水浴后的冷却时间要统一。 4. 若测定管OD 值大于1.5 时，建议将样本用试剂一适当稀释后再进行检测，并在计算时需乘以相应的稀释倍数。 本试剂盒仅供科研使用! |
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