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| Cat. Number | HK21242-48S |
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| Chemical Name | HK21242-48S 二胺氧化酶测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 二胺氧化酶DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。 测定原理： 二胺氧化酶DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质，在500nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。 需自备的仪器和用品: 天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水、无水乙醇、水浴锅。 产品组成：
实验步骤： 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。 2. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体：直接测定。 二、试剂准备 1、试剂R2：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用前加入4mL蒸馏水溶解，2-8C可保存1个月。 三、测定步骤 1. 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。 2. 操作表
三、酶活性计算公式 a．使用96孔板测定的计算公式如下1、组织DAO活力的计算 (1）按蛋白浓度计算 单位定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1umol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO (U/mg prot）=△A÷d÷εxV反总÷(Cpr×V样本)÷T (2）按样本质量计算 单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1umol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO (U/g 质量）=△A÷d÷εxV反总÷(W÷V提取×V样本)÷T 2、血清（浆）DAO活力的计算 单位定义；每mL血清(浆）在反应体系中每分钟催化产生1umol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO (U/mL)=△A÷d÷εxV反总÷V样本÷T 3、按细胞数量计算 单位定义：每10+个细胞在反应体系中每分钟催化产生.1 umol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO活性（U/104 cell)=△A÷d÷εxV反总÷(500xV样÷V提取）÷T ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5 mL/umolcm; d: 96孔板光径，0.6cm; V反总：反应总体积; V样本：加入粗酶液体积; V提取：加入提取液体积; Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL; W：样本质量，g； T：反应时间，30min; 500：细胞数量，500万。 b.使用比色皿测定的计算公式如下 1、组织DAO活力的计算 (1）按蛋白浓度计算 单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1 umol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO (U/mg prot）=△A÷d÷εxV反总÷(Cpr×V样本)÷T (2）按样本质量计算 单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1 umol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO (U/g质量）=△A÷d÷εxV反总÷(W÷V提取xV样本)÷T 2、血清（浆）DAO活力的计算 单位的定义:每mL血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1umol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO(U/mL)=△A÷d÷εxV反总÷V样本÷T 3、按细胞数量计算 单位的定义:每10+个细胞在反应体系中每分钟催化产生1umol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 DAO 活性(U/104 cell) =△A÷d÷εxV反总÷(500×V样÷V提取）÷T ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5 mL/umol/cm; d：微量玻璃比色皿光径，1cm; V反总：反应总体积; V样本：加入粗酶液体积; V提取：加入提取液体积; Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL; W：样本质量，g; T：反应时间，30min; 500:细胞数量，500万。 注意事项: 1、如果△A小于0.01，适当加大提取用样本质量；OD值大于0.8，样本可用提取液适当稀释，或者减少提取用样本质量。 2、样本蛋白质含量需要另外测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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