HK21240-48S 多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21240-48S

Chemical Name

HK21240-48S 多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase，PG）属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展。

测定原理：

PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540 nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540 nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1 支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1 : 5~10的比例（建议称取约0.1 g，加入1 mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，16000 g，离心10 min，取上清置于冰上待测。

细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万个细菌加入1 mL提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率20%或200 W，超声3 s，间隔7 s，总时间5 min）；然后4℃，16000 g，离心10 min取上清置于冰上待测。

液体：直接检测或用提取液稀释后检测。

二、试剂准备

1、试剂R1：若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解；

2、试剂R2：临用前加入10 mL 蒸馏水，60℃水浴助溶；

3、标准品：10mg 半乳糖醛酸。临用前加入0.943 mL 蒸馏水，配成50 μmol/mL 的标准液；

三、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至540 nm，蒸馏水调零。

2. 将50 μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为6、5、4、3、2、1.5 μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表：（在1.5mL离心管中）

试剂名称(uL)	测定管	对照管	空白管	标准管
样本	25	25	-	-
蒸馏水	-	-	25	-
标准溶液	-	-	-	25
试剂R1	50	50	50	50
试剂R2	50	-	50	50
40℃ 水浴准确反应2 h后，沸水浴加热10 min（盖紧，防止水分散失），取出后冷却至室温。				-
试剂R2	-	50	-	-
试剂R3	125	125	125	125
沸水浴加热5 min（盖紧，防止水分散失），取出后冷却至室温。
吸取200 μL反应液，测定540 nm处的吸光度，记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管，计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。