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| Cat. Number | HK21235-48S |
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| Chemical Name | HK21235-48S 淀粉分支酶(SBE)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 淀粉分支酶(SBE)（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定SBE活性在淀粉生物合成、农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。 测定原理： 淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收，SBE使直链淀粉含量减少，从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献) 称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。15000g，4C离心15min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前取1支加入0.6mL蒸馏水，缓慢加热，逐渐升温至沸腾，使其充分溶解，2-8°℃保存4周。 三、测定步骤 1.可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至660nm，分光光度计蒸馏水调零。 2. 样本测定：
混匀，室温静置10min，取200uL至微量玻璃比色皿/96孔板中，660nm 处读取各管吸光值，分别记为A对照管、A测定管。每个测定管需设一个对照管。 注意：若有样本浑浊，建议离心后取上清测定。 四、SBE活力单位计算 (一）、按微量玻璃比色皿计算 1、按照蛋白浓度计算 单位的定义：以波长660nm 的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在 1mL反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。 SBE活性(U/mg prot)=(A对照管-A测定管)÷A对照管xV反应×100%÷1%÷(Cpr×V样本)÷T 2、按照样本质量计算 单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每g组织在1mL反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。 SBE活性(U/g 质量)=(A对照管-A测定管)÷A对照管×V反应×100%÷1%÷(W÷V提取×V样本)÷T V样本：加入样本体积； V提取：加入提取液体积； Cpr：蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； V反应：反应体系体积； T：反应时间，20min。 (二）、按96孔板计算 1、按照蛋白浓度计算 单位的定义：以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在 1mI反应体系中每分钟降低0.5%碘蓝值为一个酶活性单位。 SBE活性(U/mg prot)=(A对照管-A测定管）÷A对照管xV反应×100%÷0.5%-(Cpr×V样本)÷T 2、按照样本质量计算 单位的定义:以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每g组织在1mL反应体系中每分钟降低0.5%碘蓝值为一个酶活性单位。 SBE活性(U/g质量)=（A对照管-A测定管)÷A对照管xV反应×100%÷0.5%÷(W÷V提取×V样本)÷T V样本：加入样本体积； V提取：加入提取液体积； Cpr：蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g；； V反应：反应体系体积； T：反应时间，20min。 注意事项: 1、可以在不同对照管中加入不同的样本，然后集中进行 1min沸水浴处理。 2、试剂R1如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。 本试剂盒仅供科研使用! |
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