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Cat. Number

HK21223-96S

Chemical Name

HK21223-96S 超氧阴离子清除能力测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

测定原理：

AP-TEMED 系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO2^－，NO2^－与对氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm 处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm 的吸光值呈负相关。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器，冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织样本：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10 的比例（建议称取约0.1 g 组织，加入1 mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000 g，4℃，离心10 min，取上清，置于冰上待测。

2、液体样本：直接检测。若有浑浊则离心后取上清待测。

3、细胞样本：收集细胞到离心管内，弃上清，按照每500 万细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细胞（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30 次），然后10000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。

二、试剂准备

试剂R2：临用前每瓶加 5.34mL 蒸馏水充分溶解。2-8℃保存4 周。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30 min 以上，调节波长至530 nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、操作表：

试剂名称（uL）	空白管	测定管
试剂R1	10	10
试剂R2	40	40
充分混匀， 25℃反应 1min
水	25	-
样品	-	25
试剂R3	50	50
充分混匀， 37℃反应 30min
试剂R4	50	50
试剂R5	50	50
充分混匀， 37℃显色 20min，在 530nm 处测定空白管和测定管的吸光值，分别记为A 空白和A 测定。空白管只需测定1-2 次。