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Cat. Number
HK21222-48S
Chemical Name
HK21222-48S 超氧阴离子清除能力测试盒(可见分光光度法)
Qty 1
50T/48S
References

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。


测定原理:

AP-TEMED 系统产生超氧阴离子,与盐酸羟胺反应生成NO2,NO2与对氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物,在530nm 处有特征吸收峰,样品对超氧阴离子的清除能力与530nm 的吸光值呈负相关。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器,冰和蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
提取液液体×1瓶2-8℃
试剂R1液体×1支2-8℃
试剂R2粉剂×2瓶2-8℃
试剂R3液体×1瓶2-8℃
试剂R4液体×1瓶2-8℃
试剂R5液体×1瓶2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、组织样本:按照组织质量(g)︰提取液体积(mL)为1︰5~10 的比例(建议称取约0.1 g 组织,加入1 mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后10000 g,4℃,离心10 min,取上清,置于冰上待测。

2、液体样本:直接检测。若有浑浊则离心后取上清待测。

3、细胞样本:收集细胞到离心管内,弃上清,按照每500 万细胞加入1mL 提取液,超声波破碎细胞(功率200w,超声3s,间隔10s,重复30 次),然后10000g,4℃,离心10min,取上清,置冰上待测。

二、试剂准备

试剂R2:临用前每瓶加 5.34mL 蒸馏水充分溶解。2-8℃保存4 周。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30 min 以上,调节波长至530 nm,分光光度计蒸馏水调零。

2、操作表:

试剂名称(uL)空白管测定管
试剂R15050
试剂R2200200
                                                                               充分混匀, 25℃反应 1min
125-
样品
-125
试剂R3250250
                                                                                充分混匀, 37℃反应 30min
试剂R4
250250
试剂R5250250
充分混匀, 37℃显色 20min,吸取1mL 于1mL 玻璃比色皿里,在530nm 处测定空白管和测定管的吸光值,分别记为A 空白和A 测定。空白管只需测定1-2 次。

四、超氧阴离子清除能力计算

超氧阴离子清除率(%)=(A 空白-A 测定)÷A 空白×100%


注意事项:

1. 样本制备好之后,立刻进行测定,请勿将样本进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。


本试剂盒仅供科研使用!


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