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Cat. Number

HK21221-96S

Chemical Name

HK21221-96S 超氧阴离子检测试剂盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

测定原理：

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据A530值可以计算样品中O2－含量。

需自备的仪器和用品：

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量玻璃比色皿/96 孔板、氯仿和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 植物、动物组织：称取约0.1g 样本，加入提取液1mL，充分研磨，12000rpm，4℃，离心20min，取20μL 上清测定蛋白含量，其余上清作为待测样本。

2. 血清或培养液：直接测定。

二、测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备

取适量亚硝酸钠标准液，将其稀释为0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125μmol/mL 的标准溶液，用这些标准管做标准曲线。

3. 操作表

试剂名称(uL)	空白管	测定管	标准管
标准溶液	-	-	40
样本	-	40	-
提取液	100	60	60
试剂R1	80	80	80
混匀，37℃水浴20min
试剂R2	60	60	60
试剂R3	60	60	60
混匀，37℃水浴20min
试剂R4	100	100	100
混匀，8000rpm，25℃，离心5min，小心吸取上层水相200μL，蒸馏水调零，微量玻璃比色皿/96 孔板，测定530nm处吸光值，计算ΔA 标准=A 标准管-A 空白管，ΔA 样本=A 测定管-A 空白管。（空白管只需做1-2 次）