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Cat. Number

HK21208-48S

Chemical Name

HK21208-48S 丙酮酸(PA)测试盒(可见分光光度法)/Pyruvate （PA）Assay Kit

Qty 1

50管/48S

References

丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。

测定原理：

丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色，在520nm处检测，光的强度与丙酮酸含量是成正比的，因此通过检测光的强度即可得到丙酮酸的含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1瓶	2-8℃
标准液	液体×1瓶	2-8℃

实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10+个)：提取液体积(mL)为500~1000：1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液)，超声波破碎(冰浴，功率20%或200w,超声3s，间隔10s，重复30次)，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

2、组织:按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5-~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入lmL提取液)，进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

3、血清（浆）样本：按照血清(浆）体积(mL)：提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清（浆)加入lmL提取液)，进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

二、试剂准备

1、标准液：丙酮酸钠，1 mg/mL。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。

2、标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.781250、0.39、0ug/mL。

3、测定操作表：在1.5mLEP管中加入。

试剂名称（uL）	测定管	标准管
样本	300	-
标准液	-	300
试剂R1	100	100
混匀，静置2min
试剂R2	500	500
混匀，于520nm波长处测定吸光值A。