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| Cat. Number | HK21198-48S |
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| Chemical Name | HK21198-48S 半胱氨酸(Cys)含量测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/48S |
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| References | 蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸（Cys）。其中，Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝，在600nm处有吸收峰；通过测定600nm 吸光度，计算Cys 含量。 需自备仪器和用品： 低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、液体样本中半胱氨酸提取：取0.2mL 液体样本，加提取液0.3mL，充分混匀，11000rpm 4℃离心10min，取上清液待测。 2、组织中半胱氨酸提取：称取约0.2g 组织，加入提取液0.5mL，冰上充分研磨，11000rpm 4℃离心10 min，取上清液待测。 二、试剂准备 1．试剂R2：用前一天，向试剂R2中加5 mL 蒸馏水充分溶解，再加磷酸1.25 mL，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴2h；冷却后加8 mL 蒸馏水，4℃可保存2 周。 2．标准品：10 mg 半胱氨酸。将标准品加入4.13mL 蒸馏水，可得到20μmol/mL 的标准液。4℃可以保存4 周。 三、测定步骤 1. 可见分光光度计预热30min 以上，调节波长到600nm，蒸馏水调零。 2. 标准液的配制：用蒸馏水稀释为2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL 浓度的标准溶液。 3. 按下表加入各试剂
混匀后室温静置15 min，于600nm 处测定吸光值。 四、半胱氨酸含量计算 1、标准曲线的绘制： 以各标准溶液浓度为x 轴，以ΔA（A 标准管-A 空白管）为y 轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A 测定管-A 空白管）带入方程求x 值。 2、半胱氨酸含量计算： （1）按液体样本的体积计算 半胱氨酸含量（μmol/mL）=x×V 样总÷V 样1 （2）按样本质量计算 半胱氨酸含量（μmol/g 质量）= x×V 样2÷（W×V 样2÷V 样总） V 样1：提取体系中加入的样本体积； V 样2：反应体系中加入的样本体积； V 样总：提取体系体积； W：样本质量，g。 注意事项： 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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