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| Cat. Number | HK21196-48S |
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| Chemical Name | HK21196-48S 氨基酸(AA)含量测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/48S |
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| References | 动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。 测定原理： 氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度，来计算氨基酸含量。 需自备的仪器和用品: 台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 组织样本：称取约0.1g组织，加试剂R1 1mL，室温下充分研磨，转移到1.5mLEP管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴提取15min;自来水冷却后，10000pm，4℃离心10min，取上清液，待测。 细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂R1，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次)；10000pm，4℃离心10min，取上清液，待测。 液体：吸取0.5mL液体加入0.5mL试剂R1，盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min；自来水冷却后，10000rpm，4°C离心10min，取上清液，待测。 二恶、试剂准备 1、试剂R3：临用前加入4mL无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入56mL蒸馏水混匀，避光保存。 2、试剂R4：临用前加5mL蒸水，充分溶解。 3、标准品: 10 mg半胱氨酸，临用前加入8.26 mL蒸馏水，得到10umolmL的半胱氨酸标准溶液备用。 三、测定步骤 1.分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。 2.操作表：
混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15min，冷却后反复颠倒EP管数次，8000rpm离心5min后取上清，于570nm测定吸光值，分别记为A测定管、A标准管、A空白管，并计算ΔA测定管=A测定管-A空白管，ΔA标准管=A标准管-A空白管，显色后务必在30min内测完。 四、氨基酸含量计算 1．按样本质量计算 氨基酸含量(umolg质量)=(C标准品×V标准品×△A测定管÷4A标准管）÷(W-V样总x×V样) 2．按蛋白浓度计算 氨基酸含量（umolmg prot ) = (C标准品xV标准品×△A测定管+AA标准管）÷(Cpr×V样) 3．按细菌或细胞数量计算 氨基酸含量(umoL104cell)=(C标准品xV标准品×AA测定管+AA标准管）÷(500×V样+V样总) 4．按液体体积计算 氨基酸含量(umo1/mL)=(C标准品×AA测定管+AA标准管）×2 C标准品：标准品浓度; V标准品：反应体系中加入标准品体积; W：样本质量，g; V样：反应体系中加入样本体积; V样总：样本总体积; Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL; 500：细菌或细胞总数，500万个; 2：提取液体时的稀释倍数。 注意事项: 1、试剂盒中试剂R3和试剂R4均需临用前配制,且避光保存。 2、为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验。 3、脯氨酸和羟脯氨酸与茆三酮反应在570nm处无吸收峰，因此，570nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。 4、如果样本吸光值大于1.2，建议将样本用试剂R1稀释后进行测定。 5、因提取过程中会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算时需用PBS单独提取后再测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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