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| Cat. Number | HK21192-96S |
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| Chemical Name | HK21192-96S γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性测定试剂盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | γ-谷氨酰转肽酶γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。 测定原理： γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；10000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：称取约0.1g 样本，加提取液1.0 mL 充分研磨，于4℃，10000rpm 离心15min，取上清液待测。 3、血清（浆）：直接检测。 二、试剂准备 1、工作液（在试剂R1瓶中配制）：临用前配制，把试剂R2倒入试剂R1瓶中，充分溶解（室温过低时可以40℃水浴促进溶解）；然后把试剂R3倒入试剂R1瓶中，混匀后室温保存。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。 2、工作液置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min以上（保证无沉淀）。 3、样本测定：
混匀后于405nm 测定10 s 时的吸光度，吹打混匀后测量130s 时的吸光度，记为A1 和A2。计算ΔA 测定管=A测2-A 测1，ΔA 空白管=A 空2-A 空1，计算ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管。 四、γ-GT活性计算 A、按96孔板计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 活性单位定义：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。 γ-GT（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×106×V反总÷（Cpr×V样）÷T （2）按样本质量计算： 活性单位定义：25℃或者37℃中，每克组织每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。 γ-GT（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×106×V反总÷（W÷V提取×V样）÷T （3）按血清（浆）体积计算： 活性单位定义：25℃或者37℃中，每毫升血清每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。 γ-GT（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×106×V反总÷V样÷T （4）按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。 γ-GT（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×106×V反总÷(500×V样÷V提取) ÷T V样：加入样本体积； V提取：加入提取液体积； T：反应时间，2min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞数量，500万细胞； ε：对硝基苯胺消光系数，9870L/mol/cm； d：96孔板光径，0.6cm； V反总：反应体系总体积； 106：单位换算系数，1mol=106μmol。 B、按微量玻璃比色皿计算： 将上述计算公式中的d=0.6 cm改为d=1cm（比色皿光径）。 注意事项： 培养细胞中γ-GT活性测定时，细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。 本试剂盒仅供科研使用! |
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