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| Cat. Number | HK21185-48S |
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| Chemical Name | HK21185-48S β-木糖苷酶测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | β-木糖苷酶（EC3.2.1.37，β-XYS）于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。 测定原理： β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。 需自备的仪器和用品： 天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、水浴锅、蒸馏水、超声破碎仪。 产品组成：
实验步骤: 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、植物样本：称取约0.1g样本，加1mL 提取液充分冰浴匀浆，然后12000rpm，4℃，离心20min，弃沉淀， 取20uL上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。 2、细菌、真菌样本：收集约500万个细胞，加入1mL提取激，超声波破碎（冰浴，功率200w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min);然后10000rpm，4℃，离心10mim，弃沉淀，取20uL上清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。 二、试剂准备 1.试剂R1：临用前取1支加入0.555 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂建议-20℃分装保存2周，避免反复冻融（1支粉剂溶解后可做48S，为了延长使用时间，此产品多给1支粉剂); 2.标准品：5umol/mL对硝基苯酚溶液。 三、测定步骤 1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至405nm，分光光度计用蒸馏水调零。 2、标准液的稀释：用试剂R2将标准液稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625umolmL，稀释可参考下表。 3、 样本测定：
四、β-木糖苷酶活性计算 根据标准管的浓度(y，umoUmL)和吸光度△A标准(x，AA标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将AA测定（x，AA测定）带入公式计算样本浓度(y，umol/mL) 。 1、按样本蛋白浓度计算: 酶活定义: 45°C，pH7.4时，每毫克蛋白质1min内催化产生1umol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性(U/mg prot）=(yxV样)÷(V样×Cpr)÷T 2、按样本质量计算: 酶活定义：45℃，pH7.4时，每克样本1min内催化产生1umol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性（U/g 质量)=(y×V样)÷(WxV样÷V样总)÷T 3．按细胞数量计算: 酶活定义：45°C，pH7.4时，每104个细胞1min内催化产生1umol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性(U/104 cell) =(y×V样):(500×V样÷V样总)÷T Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； V样：加入反应体系中样本体积； V样总：加入提取液体积; W：样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500万; T：反应时间，20min。 注意事项: 1、吸光度变化应该控制在0.05~0.6之间。否则加大样本量或稀释样本，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。 2、样本蛋白质含量需要另外测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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