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| Cat. Number | HK21181-48S |
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| Chemical Name | HK21181-48S β-半乳糖苷酶(β-GAL)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | β-半乳糖苷酶β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
β-GAL 分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL 活性。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次），15000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织的处理：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R1：临用取1 支加入1.25mL 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存4 周，避免反复冻融（1 瓶粉剂溶解后可做100T，为了延长使用时间，此产品多给1 瓶粉剂）。 2、标准品：5μmol/mL 的对硝基苯酚溶液。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，分光光度计蒸馏水调零。 2、标准溶液的稀释：用蒸馏水将标准液稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL 标准溶液待测。 3、样本测定（在EP管或96孔板中依次加入下列试剂）：
充分混匀，于400nm处测定吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2次。 四、β-GAL活性计算 1、标准曲线的建立： 根据标准管的吸光度（x，ΔA标准）和浓度（y，nmol/mL）建立标准曲线，将ΔA（x，ΔA测定）带入标准曲线中，计算样本生成的产物量y（nmol/mL）。 2、β-GAL活性计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg 组织蛋白每小时产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 β-GAL活力(U/mg prot)=(y×V反总)÷(V样×Cpr)÷T （2）按样本质量计算： 单位的定义：每g 组织每小时产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 β-GAL活力(U/g 质量)＝(y×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T （3）按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 β-GAL活力(U/104 cell)= (y×V反总)÷(500×V样÷V样总)÷T Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度需要另外测定； V反总：反应体系总体积； V样：加入反应体系中样本体积； V样总：加入提取液体积； W：样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500万； T：反应时间，0.5h。 注意事项： 提取液中含有使蛋白变性的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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