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| Cat. Number | HK21176-24S |
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| Chemical Name | HK21176-24S α-葡萄糖苷酶(α-GC)测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/24S |
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| References | α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖，不仅与细胞壁的松弛或加固有关，而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。 测定原理： α-GC分解对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清;按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次)，15000g，4℃，离心20min.取上清，置冰上待测。 2、组织的处理：称取约0.2g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。 3、液体样本：直接检测。若溶液有浑浊需离心后取上清进行测定。 二、试剂准备 1、试剂R1：临用前取1瓶加入10mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂建议-20℃分装保存4周，避免反复冻融; 2、标准品：5umolmL的对硝基苯酚溶液。 三、测定步骤 1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至400nm，分光光度计蒸馏水调零。 2、标准品：将5umol/L的对硝基苯酚溶液，用蒸馏水稀释成100、50、25、12.5、6.25、0nmol/L标准液使用，现用现配。 3、加样表:
充分混匀，室温静置2min 后，于400nm处测定吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA=A 测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管设一个对照管。标准管和空白管只需做1-2次。 四、α-GC活力计算 1、标准曲线建立： 根据标准管的浓度（x，nmol/mL）和吸光度（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y，ΔA测定）代入公式计算样本产物浓度x（nmol/mL）。 2、α-GC活力计算 （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白在每mL体系中每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 GC活力（U/mg prot）=（x×V反总）÷（V样×Cpr）÷T （2）按样本质量计算： 单位的定义：每g组织在每mL体系中每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 GC活力（U/g 质量）=（x×V反总）÷（W×V样÷V样总）÷T （3）按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每1万个细菌或细胞在每mL体系中每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 GC活力（U/104 cell）=（x×V反总）÷（1000×V样÷V样总）÷T Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度需要另外测定； V反总：反应体系总体积，0.28mL； V样：加入反应体系中样本体积，0.03mL； V样总：加入提取液体积，1mL； W：样本质量，g； 1000：细胞或细菌总数，1000万； T：反应时间，0.5h。 注意事项： 提取液中含有使蛋白变性的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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