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| Cat. Number | HK21175-48S |
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| Chemical Name | HK21175-48S α-淀粉酶测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。a-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。 测定原理： 淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540nm有吸收峰;通过测定540nm 吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。a-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70C钝化15min。因此粗酶液经过70°C钝化15min，就只有a-AL能够催化淀粉水解。 需自备的仪器和用品: 酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献） 称取约0.1g样本，加0.8mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；6000g，室温离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即为淀粉酶原液。 二、试剂准备 1、 试剂R1：若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用； 2、 试剂R2：临用前取1支试剂R3加入1瓶中，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃4周； 3、 标准品：10 mg无水葡萄糖。临用前加1 mL蒸馏水，配成10 mg/mL葡萄糖标准液，2-8℃两。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540 nm，分光光度计蒸馏水调零。 2、 标准液的稀释：将葡萄糖用蒸馏水 为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 mg/mL的标准溶液。备注:实验中每个标准管需75uL标准溶液。 3、对照管样本处理：取250uL样本沸水浴5min作为对照管使用。 4、按照操作表依次加入各个试剂:
混匀，沸水浴10min，取200uL至96孔板或微量比色皿中，540nm处读取吸光度，分别记为A对照、A测定、A标准和A空白，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2次。 四、α-淀粉酶活性计算 1、标准曲线的绘制 以标准液的浓度(mg/mL)为x轴，对应的ΔA标准为y轴绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将ΔA测定代入方程中计算得到样本浓度（x，mg/mL)。 2、α-淀粉酶活性的计算 (1）按照样本质量计算 单位定义：每g 组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。 α-淀粉酶活性(U/g质量)=x×V样÷(W×V样÷V样总)÷T (2）按照蛋白质浓度计算 单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1个酶活性单位。 α-淀粉酶活性(U/mg prot)= x×V样÷(V样×Cpr）÷T V样：加入反应体系中样本体积; V样总：提取液总体积; Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量，g; T：反应时间, 5min。 注意事项: 测定的吸光值大于1.5时，可以对样本进行适当稀释后测定。若吸光值过小，可以浓缩淀粉酶稀释液或者淀粉酶原液。注意同步修改计算公式。 本试剂盒仅供科研使用! |
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