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| Cat. Number | HK21172-24S |
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| Chemical Name | HK21172-24S α-半乳糖苷酶(α-GAL)测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/24S |
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| References | α-半乳糖苷酶α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能专一地催化α半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供最初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。 测定原理： α-GAL分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL活性。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声破碎仪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3，间隔10，重复30次)，15000g，4℃，离心2Omin，取上清，置冰上待测。 2、组织的处理：称取约0.1g组织，加入lmL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R1：临用前取1支加入2.67mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融； 2、标准品：5 umol/mL的对硝基苯酚溶液。 三、测定步骤 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。 2、标准液的稀释：将标准液用蒸馏水稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmolmL标准溶液待测。 3、样本测定（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂)：
四、a-GAL活性计算 1、标准曲线的建立: 根据标准管的吸光度（y，AA标准）和浓度(x， nmolmL）建立标准曲线，将AA (y，AA测定〉带入杯准曲线中，计算样本生成的产物量x (nmol/mL）。 2、a-GAL活性计算 (1)按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 a-GAL活力(U/mg prot)=(xxV反总)÷(V样×Cpr)÷T (2）按样本质量计算 单位的定义：每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 a-GAL活力(U/g质量)=(xxV反总)÷(WxV样÷V样总)÷T (3）按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 a-GAL活力(U/104 cell)=(x×V反总)÷(500×V样÷V样总)÷T Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度需要另外测定; V反总：反应体系总体积; V样：加入反应体系中样本体积; V样总：加入提取液体积; W：样本质量，g; 500：细胞或细菌总数，500万; T：；反应时间，0.5h。 注意事项: 提取液中含有使蛋白变性的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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