服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21170-48S |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21170-48S UDPG焦磷酸化酶(UGP)测试盒(紫外分光光度法) |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
50T/48S |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP，EC 2.7.7.9）在自然界广泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG），UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式，作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。 测定原理： UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖，其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体：直接检测。 二、试剂准备 1. 试剂R1：临用前加30 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2 周。 2. 试剂R2：临用前加2.5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后4℃保存，禁止反复冻融，4℃保存1 周。 3. 试剂R3：临用前加1.4 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2 周。 4. 试剂R4：临用前每支加1 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。 5. 工作液的配制：将试剂R1：试剂R2：试剂R3：试剂R4：试剂R5：试剂R6按体积比=600：100：20：40：100：250混合，现用现配。 三、测定步骤 1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、操作表：
四、UGP 酶活计算 1、按微量玻璃比色皿进行计算： （1）按照样本蛋白浓度计算 酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。 UGP（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(V样×Cpr) ÷T （2）按照样本质量计算 酶活单位定义：每克组织每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。 UGP（U/g 质量）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T （3）按照细胞数量计算 酶活单位定义：每104个细胞每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。 UGP（U/104 cell）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T （4）按照液体体积计算 酶活单位定义：每毫升液体每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。 UGP（U/mL）=[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷V样÷T V反总：反应体系总体积； ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积； V样总：加入提取液体积； T：反应时间，5min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g ； 500：细胞或细菌总数，500万； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 2、按96孔UV板进行计算： 将计算公式中的d-1cm修改为d-0.6cm进行计算即可。 注意事项： 1、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。 2、A大于0.6或者A2测定大于1.5时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（5min或10min）来测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
