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| Cat. Number | HK21168-24S |
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| Chemical Name | HK21168-24S NO含量测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/24S |
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| References | 一氧化氮（Nitric Oxide，NO）是一种极不稳定的生物自由基，分子小，结构简单，常温下为气体，微溶于水，具有脂溶性，可快速透过生物膜扩散，作为一种新型的生物信使分子，在细胞间及细胞内发挥传递信号的作用。其广泛分布于生物体内各组织中，特别是神经组织中。在机体神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中也起着十分重要的作用。 测定原理： NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-和NO3-，本法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原成NO2-，在酸性条件下，NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定吸光值，可以计算NO含量。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织样本：按质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5~10 比例（建议称取0.2g 样本，加入1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于4 ℃，12000rpm，离心15min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。 2. 细胞样本：按细胞数量（104）：提取液体积（mL）500~1000 : 1 的比例（建议1000 万细胞加入1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴超声破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后于4℃，12000rpm，离心15min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。 3. 液体样本：直接测定。 二、试剂准备 1、试剂R1：粉剂置于试剂瓶内EP 管中，管内粉剂含量非常少，很难观察查到，直接使用即可。临用前加入2.5mL 蒸馏水混匀，-20℃分装保存； 2、显色液：临用前按照实验所需用量按A 液：B 液=1:1 充分混匀，现配现用； 3、标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。 三、测定步骤 1．分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。 2．将试剂R1置于冰上备用。 3．标准液的制备：将标准品用蒸馏水倍比稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL标准液。 4．操作表：在0.6mL EP管中操作
四、NO 含量计算 1. 标准曲线的绘制： 以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y= kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。 2. NO含量的计算： （1）按样本蛋白浓度计算 NO含量（μmol/mg prot）= x×V样÷(V样×Cpr) （2）按样本质量计算 NO含量（μmol/g 质量）= x×V样÷(W×V样÷V样总) （3）按样本细胞数量计算 NO含量（μmol/104 cell）= x×V样÷(V样×细胞数量÷V样总) （4）按样本液体体积计算 NO含量（μmol/mL）= x×V样÷V样 V样：加入样本体积； V样总：加入提取液体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 细胞数量：以104 为单位，万个。 注意事项： 1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 2、尽量使用新鲜样本进行检测，试剂R2具有腐蚀性，操作时请做好防护措施。 3、组织颜色对实验结果无影响。 4、当要测定的培养液中有颜色时（在550nm 下有吸收峰），则需要补测样本的对照管，即将试剂R1和显色液用相同体积的蒸馏水代替。在550 nm 下测定吸光值A，分别记为 A 标准、A 测定、A 空白、A 对照，计算ΔA标准=A 标准-A 空白，ΔA 测定=A 测定-A 对照。此时试剂盒规格为100T/48S。 本试剂盒仅供科研使用! |
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