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Cat. Number

HK21148-24S

Chemical Name

Na+k+-ATP酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

Na+K+- ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。

测定原理：

Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞或组织样本的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 试剂R1，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、试剂准备

1、试剂R3：临用前用1 mL 蒸馏水溶解，现用现配。用不完的试剂-20℃可保存一周。

2、试剂R5：用时加入3 mL 双蒸水， 4℃保存。

3、试剂R6：用时加入15 mL 双蒸水，溶解后4℃保存一周。

4、试剂R7：用时加入15 mL 双蒸水，溶解后4℃保存一周。

5、标准品：10 μmol/mL 标准磷贮备液。将标准品20 倍稀释，即取 0.1 mL 标准品加1.9 mL 蒸馏水充分混匀，配成0.5 μmol/mL 标准磷应用液。

6、定磷剂的配制：按H2O:试剂R6:试剂R7:试剂R8=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据实验用量现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

三、测定步骤

1、可见分光光度计预热30min 以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2、酶促反应（在EP 管中加入下列试剂）

3、定磷

试剂名称(uL)	空白管	标准管	对照品	测定管
标准磷应用液	-	100	-	-
上清液	-	-	100	100
蒸馏水	100	-	-	-
定磷试剂	1000	1000	1000	1000
混匀，40℃水浴10min，在 660nm 处，记录各管吸光值。（空白管和标准管各只要做1-2 管）