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| Cat. Number | HK21145-96S |
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| Chemical Name | HK21145-96S 硫化氢(H2S)含量测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 硫化氢（H2S）是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。 测定原理： H2S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在665nm处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算H2S含量。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 1. 细菌或培养细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个)：提取液1体积(mL)=500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液1)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间3min)，12000g 4℃离心10min；然后取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液2，12000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。 2.组织样本：按照组织质量(g)：提取液1体积(mL)为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液1)，进行冰浴匀浆； 12000g 4℃离心 10min；然后取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液2，12000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清(浆)或其它液体样本：取100uL 血m清(浆)或其它液体样本加入1mL提取液1，12000g，4℃离心10min；然后取 0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液2，12000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。 二、测定步骤 1.分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至665nm，用蒸馏水调零。 2.加样表：（按顺序在EP管或96孔板中加入下列试剂)
充分混匀，室温静置10min后，665nm处测定各管吸光值A，分别记为A测定、A空白，计算ΔA=A测定-A空白。空白管只需测1-2次。 四、HS含量计算 1、用微量石英比色皿测定的计算公式如下 以标准溶液浓度(nmol/mL)为x轴，以其对应的吸光值为y轴，绘制标准曲线，将ΔA带入公式中得到x (nmol/mL) 。 (1）按照样本质量计算 HS含量(nmolg质量)=x×(V上清+V提取液2)÷(W×V上清÷V提取液1） (2)按照样本蛋白浓度计算 HS含量（nmol/mg prot )= x×V样÷(V样×Cpr) (3）按照细胞数量计算 HS 含量(nmo1/104 cell) =x× (V上清+V提取液2)÷(cellsxV上清÷V提取液1） (4）按照液体体积计算 HS含量（nmolmL)=x×(V上清+V提取液2)÷[V液体×V上清÷(V提取液1+V液体）] V上清：提取时上清液的体积; V提取液1：加入提取液1的体积; V提取液2：加入提取液2的体积; V样本：反应液中加入样本的体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量,g: cells：细胞数量，104个; V液体：液体样本体积。 2、用96孔板测定的计算公式如下 以标准溶液浓度（nmolmL)为x轴，以其对应的吸光值为y轴，绘制标准曲线；将△A带入公式中得到x (nmol/mL)。 (1）按照样本质量计算 HS含量(nmol/g 质量)=x× (V上清+V提取液2)÷(W×V上清÷V提取液1） (2）按照样本蛋白浓度计算 HS含量(nmol/mg prot) = x×V样÷(V样×Cpr） (3）按照细胞数量计算 HS含量(nmol/104 cell) =x×(V上清+V提取液2)÷(cells×V上清÷V提取液1） (4）按照液体体积计算 HS含量(nmol/mL)=x×V上清+V提取液2)÷[V液体×V上清÷(V提取液1+V液体）] V上清：提取时上清液的体积; V提取液1：加入提取液1的体积; V提取液2：加入提取液2的体积; V样本：反应液中加入样本的体积; Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量，g； cells：细胞数量，104个; V液体：液体样本体积。 注意事项: 1、如果AA值过低或接近空白值，建议增加样本量后再进行测定;如果ΔA>1.2，建议稀释样本后再进行测定，计算公式中要乘以相应的稀释倍数。 本试剂盒仅供科研使用! |
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