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| Cat. Number | HK21143-48S |
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| Chemical Name | HK21143-48S 土壤FDA水解酶试剂盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | FDA水解反应能很好的反应土壤中微生物活性和土壤质量的变化以及生态系统中有机质的转化，是土壤质量研究中的重要生物学指标之一。 测定原理： FDA是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并经脱水反应，产生酶解终产物荧光素，稳定不易被分解，并在490nm处有强吸收峰，通过检测490nm处的吸光值变化可计算得FDA水解酶活性。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、天平、台式离心机、恒温水浴锅/恒温培养箱、丙酮（不可快递）、研钵、30-50 目筛。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50 目筛。（土样要求参考注意事项1.） 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前取1 支加1 mL 丙酮溶解，用不完的-20℃分装保存一周，避免反复冻融； 2、标准品：10 mg 荧光素。临用前加入3.03 mL 50%丙酮（丙酮（V）：蒸馏水（V）=1:1）配成10 μmol/mL的荧光素标准溶液，可45℃水浴促进溶解，-20℃分装保存两周，避免反复冻融。 三、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至490nm，分光光度计用50%丙酮调零。 2. 标准溶液的稀释：取100μL 10μmol/mL 荧光素标准液，加入400μL50%丙酮，充分混匀，配制成2μmol/mL标准液待测（即标准管），取500μL 50%丙酮作为0μmol/mL 标准液待测（即空白管），现用现配。（实验中每管需要200μL，为减小实验误差，故配制大体积）。 3. 分别吸取标准液200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中，测定490nm 下的吸光度，记为A 标准、A 空白。计算ΔA 标准=A 标准-A 空白。（空白管和标准管只需测定1-2 次）。 4. 样本测定
四、FDA 水解酶活性计算公式 酶活性定义：每克土壤每天产生1μmol 荧光素的量为一个酶活力单位。 FDA 活性（U/g 土样）=（ΔA 测定÷ΔA 标准×C 标准品）×V 反总÷W ÷T C 标准品：标准品浓度2μmol/mL； V 反总：反应总体积，0.3mL； W：样本质量，g； T：反应时间，1h=1/24d。 注意事项： 1. 尽量采用新鲜土样或者短期低温保存样本，否则很难准确反映酶的活性。 2. 测定之前进行预实验，若吸光值大于1.2，可适当减少土样质量再测定。若吸光值过小，可增加土样质量或增加反应时间来进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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