HK21142-24S 土壤FDA水解酶测试盒(可见分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21142-24S

Chemical Name

HK21142-24S 土壤FDA水解酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

FDA水解反应能很好的反应土壤中微生物活性和土壤质量的变化以及生态系统中有机质的转化，是土壤质量研究中的重要生物学指标之一。

测定原理：

FDA是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并经脱水反应，产生酶解终产物荧光素，稳定不易被分解，并在490nm处有强吸收峰，通过检测490nm处的吸光值变化可计算得FDA水解酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、台式离心机、恒温水浴锅/恒温培养箱、丙酮（不可快递）、研钵、30-50目筛。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50 目筛。（土样要求参考注意事项1.）

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前取1 支加1.5 mL 丙酮溶解，用不完的-20℃分装保存一周，避免反复冻融；

2、标准品：10 mg 荧光素，临用前加入3.03 mL 50%丙酮（丙酮（V）：蒸馏水（V）=1:1）配成10 μmol/mL的荧光素标准溶液，可45℃水浴促进溶解，-20℃分装保存两周，避免反复冻融。

三、测定步骤

1. 分光光度计预热30min，调节波长至490nm，用50%丙酮调零。

2、标准溶液的稀释：取200μL 10μmol/mL荧光素标准液，加入800μL 50%丙酮，充分混匀，配制成2μmol/mL标准液待测（即标准管）；取1mL 50%丙酮作为0μmol/mL标准液待测（即空白管），现用现配。（实验中每管需要1mL）。

3、分别吸取标准液1mL于1mL玻璃比色皿中，测定490nm下的吸光度，记为A标准、A空白。计算ΔA标准=A标准-A空白。（空白管和标准管只需测定1-2次）。

4. 样本测定

加入试剂（uL）	对照管	测定管
样本	100	100
试剂R1	500	500
丙酮	450	-
试剂R2	50	50
充分混匀，置于37℃恒温水浴锅或37℃恒温培养箱中，准确反应1h，期间每隔10min 震荡一次。
丙酮	-	135
10000g，25℃，离心5min，取200μL 上清于1mL 玻璃比色皿中，测定490nm 处吸光值A，分别记为A 测定、A 对照。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照。