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Cat. Number

HK21140-24S

Chemical Name

Ca++Mg++-ATP酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

Ca++Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。

测定原理：

根据Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP 酶活性高低。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤:

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂R1，超声波破碎细菌或细胞(功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次)；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约0.1g组织，加入1mL试剂R1进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样本：直接检测。

二、试剂准备

1、试剂R3：临用前取1支加入1mL蒸馏水充分混匀待用；现用现配。用不完的试剂-20℃分装保存一周。

2、试剂R6：临用时加入15mL蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。

3、试剂R7：临用时加入15mL蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。

4、标准品：10mmolL标准磷贮备液。将标准品20倍稀释，即取0.1mL标准品加1.9mL蒸馏水充分混匀，配成0.5umol/mL标准磷应用液，现用现配。

5、定磷剂的配制：按H2O:试剂R6:试剂R7:试剂R8=2:1:1:1比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷染，定磷剂根据样本量现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，需用蒸馏水调零。

2、酶促反应（在EP管中加入下列试剂)

3、定磷（在EP管或96孔板中加入下列试剂）

试剂名称(uL)	空白管	标准管	对照管	测定管
标准磷应用液	-	100	-	-
上清液	-	-	100	100
蒸馏水	100	-	-	-
定磷试剂	1000	1000	1000	1000
混匀，40C水浴10min，冷却至室温，在 660nm处，记录各管吸光值。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管，标准管和空白管只需测1-2次。