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| Cat. Number | HK21136-24S |
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| Chemical Name | HK21136-24S ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒(紫外分光光度法) |
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| Qty 1 |
25T/24S |
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| References | 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。 测定原理： AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献) 称取约0.1g组织加入lmL提取液，冰浴中匀浆。10000g , 4C离心10min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 1．试剂R2：临用前取1瓶试剂R2A加入5mL试剂R2B充分溶解，用不完的试剂建议-20℃分装保存4周，避免反复冻融; 2．试剂R3：临用前取1瓶加1.5 mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂建议-20℃分装保存4周，避免反复冻融; 3．试剂R4：临用前取1支加入500uL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。 4．试剂R5：临用前加入500uL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存8周，避免反复冻融。 三、测定步骤 1．紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2．在EP管中按顺序加入下列试剂
迅速混匀后在340nm波长下测定10s吸光值A1和130s吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。 四、AGP活性计算 1、按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。 AGP活性（U/mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（Cpr×V样本） （此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度） 2、按照样本质量计算 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。 AGP活性（U/g 质量）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷T÷（W×V样本÷V提取） T：反应时间，15min； ε：NADPH消光系数，6.22×10-3mL/nmol/cm； V反总：反应总体积； d：石英比色皿光程，1cm； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； V样本：加入的样本体积； V提取：加入的提取液体积； W：样本质量，g。 注意事项： 1、 如果一次性测定样本较多，可以将试剂R1、R2按比例配成混合液1，将试剂R1、R3、R4和R5按比例配成混合液2。 本试剂盒仅供科研使用! |
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