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| Cat. Number | HK21132-48S |
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| Chemical Name | HK21132-48S 6-磷酸葡糖糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒(紫外分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/48S |
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| References | 磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH 逆境生理中具有重要作用。 测定原理： 6PGDH 催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH 在340nm 有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 吸光度增加速率，计算6PGDH 活性。 需自备的仪器和用品： 低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 称约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清粗酶液，待测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前配制，加入5 mL 试剂R1，混匀； 2、试剂R3：临用前配制，加入5 mL 试剂R1，混匀。 三、测定步骤 1. 紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2. 试剂R1置于37℃水浴预热30min 以上。 3. 加样表（在微量石英比色皿/96 孔UV 板中依次加入）
于340nm 处测定3min 内吸光值变化，第0s 吸光值记为A1，第180s 吸光值记为A2。记ΔA 测定=A2 测定-A1测定，ΔA 空白=A2 空白-A1 空白。 四、6PGDH 活性计算 a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。 6PGDH 酶活性(U/mg prot) =[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)÷T （2）按样本质量计算 活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。 6PGDH 酶活性(U/g 质量) =[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×W)÷T ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L/moL/cm； d：比色皿光径，1cm； V 反总：反应体系总体积； Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定； V 样：反应体系中加入粗酶液体积； V 样总：提取液体积； T：反应时间，3min； W：样本质量，g。 b.使用96 孔板测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。 6PGDH 酶活性(U/mg prot)=[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)÷T （2）按样本质量计算 活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。 6PGDH 酶活性(U/g 质量) =[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×W)÷T ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L/moL/cm； d：96 孔板光径，0.6cm； V 反总：反应体系总体积； Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定； V 样：反应体系中加入粗酶液体积； V 样总：提取液体积； T：反应时间，3min； W：样本质量，g。 注意事项： 1. 试剂R2和试剂R3须现配现用，当天未用完试剂保存在4℃，可保存1 周。 2. 样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融； 3. 若样本初始（0s）读值大于0.5 且ΔA 测定小于0.1，可尝试将样本进行稀释后测定。 4. 使用96孔板测定时，可根据样本数量将试剂R1（预热后）、R2、R3预混为工作液，因是根据反应速率计算酶活，为保证每个样本的反应时间尽量一致不推荐同时测过多样本。 本试剂盒仅供科研使用! |
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