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Cat. Number
HK21127-96S
Chemical Name
HK21127-96S 淀粉含量测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/96S
References

淀粉是植物中糖的主要储存形式,其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。

 

测定原理: 

利用80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖, 采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量,即可计算淀粉含量。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿或者96孔板、研钵、冰、浓硫酸(不允许快递)、蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
试剂R2液体×1 瓶2-8℃
试剂R3粉剂×2 瓶2-8℃
标准品粉剂×1 支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、称取约0.03g样本于研钵中研碎,加入0.6mL试剂R1,充分匀浆后转移到EP管中,80C水浴提取30min,3000g,常温离心5min,弃上清,留沉淀。

2、沉淀中加入0.3mL双蒸水,放入沸水浴中糊化15min(盖紧,以防止水分散失)。

3、冷却后,加入0.6mL试剂R2,放入沸水浴中提取15min,振荡3-5次。

4、冷却后,8000g,常温离心15min,取上清液待测。若离心后仍有浑浊,可重复离心,取上清即可。

二、试剂准备

1、标准品:临加入1 mL蒸馏水其溶解制备10 mg/mL葡萄糖,2-8℃保存两周;

2、工作液的配制:临用前取1瓶试剂R3加入2.625 mL蒸馏水后,缓慢加入14.875mL浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用,不完的可以2-8℃周。

三、测定步骤

1.分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。

2.调节水浴锅至95℃。

3.标准品的制备:将10mg/mL葡萄糖标准液进行稀释得到0.4、0.2、0.1、0.05、0.04、0.03、0.02mg/mL标准溶液备用。

实验中每个标准管需50μL标准溶液。

4.操作表:在EP管中依次加入:

试剂名称(uL)空白管标准管测定管
标准溶液-50-
蒸馏水50--
样本--50
工作液250250250
95℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),自然冷却至室温,取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中,在620nm波长下测定吸光度值A标准、A测定及A空白。计算ΔA标准=A标准-A空白,ΔA测定=A测定-A空白。标准曲线只需做1-2次。空白管只需做1-2次。

四、淀粉含量计算

1、标准曲线绘制: 根据管的浓度(x,mg/mL)和吸光ΔAy,ΔA),建立曲线。将ΔA测定代入方程得到x(mg/mL)。

2、淀粉含量计算:

淀粉含量(mg/g 质量)=x×V提取÷W÷1.11×F

V提取:提取后体积;

W:样本质量,g;

F:样本稀释倍数;

1.11:是此法测得葡萄糖含量换算为淀粉含量的常数,即111μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100μg淀粉用蒽酮试剂显示的颜色。 


注意事项

1. 由于工作液具有强腐蚀性,请谨慎操作。

2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。


本试剂盒仅供科研使用!

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