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Cat. Number
HK21125-48S
Chemical Name
HK21125-48S β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/48S
References

β-1,3葡聚糖酶β-1,3-GA(EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。

测定原理:
β-1,3-GA水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
提取液液体×1瓶2-8℃
试剂R1粉剂×2支2-8℃
试剂R2液体×1瓶2-8℃
标准品粉剂×1支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500万细菌或细胞加入1mI提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200w,超声3s,间隔10s,重复30次);12000g 4c离心10min,取上清,置冰上待测。

二、试剂准备

1.试剂R1:临用前取1支加1mL蒸馏水溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;

2.标准品:10 mg无水葡萄糖,临用前加入1mL蒸馏水溶解,配制成10 mg/mL葡萄糖溶液备用,2-8℃保存2周。

三、测定步骤

1.分光光度计或酶标仪预热30min 以上,调节波长至540nm,分光光度计蒸馏水调零。

2.标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。

3.样本测定:在1.5mL EP管中依次加入下列试剂

试剂名称(uL)测定管对照管标准管空白管
样本3535--
标准液--35-
蒸馏水-353570
试剂R135---
                                                                              充分混匀,放入37C水浴60 min
试剂R2230

230

230230

充分混匀,沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,取200uL至微量玻璃比色皿或96孔板中,540nm处记录各管吸光值A,ΔA=A测定-A对照。空白管和标准曲线只需做1-2次。

如果吸光值大于2,可以用提取液对样本稀释后测定。

四、B-1,3-GA活性计算

1、标准曲线的建立:

根据标准管吸光度x(A标准管-A空白管)和浓度(y,mg/mL)建立标准曲线,将ΔA带入公式中计算出样本中产生的还原糖的含量y值(mg/mL)。

2、B-1,3-GA活性计算:

(1)按蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U/mg prot)=(yxV1)÷(V1×Cpr)÷T

(2)按样本质量计算

单位的定义:每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U/g 质量)=(yxV1)÷(WxV1÷V2)÷T

(3)按细菌或细胞数量计算

单位的定义:每1万个细胞或细菌每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U/104 cell)=(yxV1)÷(500xV1÷V2)÷T

V1:加入反应体系中样本体积;

V2:加入提取液体积;

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; 

W:样本质量,g;

T:反应时间,60min=1h;

500:细菌或细胞总数,500万。



本试剂盒仅供科研使用!

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