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| Cat. Number | HK21124-24S |
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| Chemical Name | HK21124-24S β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/24S |
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| References | β-1,3葡聚糖酶β-1,3-GA(EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1．组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液)，进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2．细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500万细菌或细胞加入1mI提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次)；12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 1．试剂R1：临用前取1支加1mL蒸馏水溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周； 2．标准品：10 mg无水葡萄糖，临用前加入1mL蒸馏水溶解，配制成10 mg/mL葡萄糖溶液备用，2-8℃保存2周。 三、测定步骤 1.分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，分光光度计蒸馏水调零。 2.标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。 3.样本测定：在1.5mL EP管中依次加入下列试剂
充分混匀，沸水浴5min(盖紧，防止水分散失)，流水冷却，540nm处记录各管吸光值A，ΔA=A测定-A对照。空白管和标准曲线只需做1-2次。 如果吸光值大于2，可以用提取液对样本稀释后测定。 四、B-1,3-GA活性计算 1、标准曲线的建立： 根据标准管吸光度x(A标准管-A空白管）和浓度(y，mg/mL)建立标准曲线，将ΔA带入公式中计算出样本中产生的还原糖的含量y值（mg/mL)。 2、B-1,3-GA活性计算： (1)按蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(yxV1)÷(V1×Cpr)÷T (2)按样本质量计算 单位的定义：每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/g 质量)=(yxV1)÷(WxV1÷V2)÷T (3)按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万个细胞或细菌每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/104 cell)=(yxV1)÷(500xV1÷V2)÷T V1：加入反应体系中样本体积; V2：加入提取液体积; Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量，g; T：反应时间，60min=1h; 500：细菌或细胞总数，500万。 本试剂盒仅供科研使用! |
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