Easy-High EndoFree Plasmid Maxi Kit
无内毒素质粒大提试剂盒使用说明书
产品简介
聚合美质粒大提试剂盒适用于无内毒素高纯度质粒 DNA 的大量制备与纯化,柱上去除内毒素,操作简单.菌体经改良的碱裂解处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异高效地被离心柱硅胶膜吸附.通过去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他杂质,最后得到高纯度的无内毒素质粒 DNA,所得质粒可直接用于酶切,转化,PCR,测序,细胞转染等分子生物学实验.高拷贝质粒,100ml 菌液通常能提到500-1500ug 质粒,低拷贝质粒,200ml 菌液通常能提到 200-600ug 质粒（提取效率优于市面上其他品牌同等产品）.订购热线：021-60498804
产品特色
快捷、高效：颜色变化，适合判断；操作简便，得率高，节约时间；
纯度高：沉淀致密，去杂干净；
内毒素去除简单：柱上去除内毒素，方便快速，清除干净。
产品组份
| 试剂盒成分 | 10 T |
| Buffer BL | 25 ml |
| Solution I | 100 ml |
| Solution II | 100 ml |
| Solution N3 | 100 ml |
| ToxinOut Buffer | 60 ml |
| Buffer WB2 (concentrate) | 60 ml |
| Buffer EB | 30 ml |
| RNase A (10 mg/ml) | 1 ml |
| MaxiSpin Columns with Collection Tubes （50 ml） | 10 个 |
| Collection Tubes （50 ml） | 10 个 |
注意：使用前将全部 RNase A 溶液加到 Solution I 中混合均匀，2-8℃保存；按要求在 Buffer WB2 中加入无水乙醇）
储存条件
15-25℃干燥条件下，可保存 12 个月；更长时间的保存可置于 2-8℃。单独包装的 RNase A 在室温可稳定保存 12 个月。加入
RNase A 后的 Solution I 应置于 2-8℃保存，可稳定保存 6 个月。若溶液 II 产生沉淀，应在使用前置于 37℃下溶解沉淀后再使用。
注意事项
细菌培养时间一般为 12-16 小时（用锥形瓶或者试管摇菌，留够足够的空间让细菌接触空气，利于细菌生长），如接种量大则
应减少培养时间，过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒 DNA 突变；
每次使用时都要注意 Solution II 和 N3 是否形成沉淀，如有沉淀 37℃溶解后再用；
加入 Solution II 裂解细菌，直至溶液成紫红色粘稠透明状，时间过长会导致质粒 DNA 打断变性；
质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。
操作步骤
柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的平衡液 BL，10,000 rpm 离心 2 min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新
放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
取 100-200 ml（低拷贝质粒可收集更多菌液，最高 300ml 菌液）过夜培养的菌液，室温 10,000 rpm 离心 2 min，弃上清。
加入 10 ml Solution I，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀，呈现出均匀混浊的棕红色。
注意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低。
加入 10 ml Solution II，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠的紫红色。
注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组 DNA 片段的污染，所用时间不要超过 5 min，以免质粒受到破坏，如未完全变得清亮，可能
是菌体太多，可增加 Solution II 的用量，在后续的操作中 Solution N3 的用量也要相应增加。
加入 10 ml Solution N3，立即温和颠倒混匀，可见红黄相间的絮状物产生，继续混匀直到完全变为黄色。然后 10,000 rpm 离心
10 min，将上清转移至干净离心管（自备）中，注意不要带入沉淀。
注意：1）Solution N3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有紫色漂浮物，说明复性不充分，继续混匀至溶液颜
色完全变为澄清的黄色。
2）离心后在最上层可能会形成一层致密的漂浮膜，注意不要倒入吸附柱。
（如果实验室离心机采用吊篮式，不是固定转子，转速达不到 10000rpm，可以采用吊篮离心的最大转速 4250g，离心 10 分钟）
加入 0.3 倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀。
注意：加入异丙醇过多容易导致 RNA 污染。
将步骤 5 中液体与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱中（使用当天用平衡液处理的吸附柱，放入 50 ml 收集管中），
10,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中的滤液。
注意：吸附柱的最大容积为 15 ml，所以上步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不
超过 10 ml，以防发生漏液现象。
向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer，室温静置 5 min，10,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。
加入 10 ml Buffer WB2，室温 10,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。
注意：Buffer WB2 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发。
加入 5 ml Buffer WB2，室温 10,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。
室温 10,000 rpm 离心 5 min，甩干残留液体。
将离心吸附柱置于一个新的 50 ml 塑料离心管中，打开管盖，放置 5 min，使乙醇彻底挥发干净。
加入 1-2 ml 洗脱液 Buffer EB，室温放置 2 min，10,000 rpm 离心 2 min，离心管底溶液即质粒 DNA。
注意：为增加洗脱效率，可将得到的质粒溶液重新加入到吸附柱中重复步骤 11 一次，如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其
pH 值在 7.0 - 8.5 之间。
低拷贝或大质粒（>10 kb）提取】
低拷贝质粒，或>10 kb 的质粒，或提取农杆菌质粒，或提取革兰氏阳性菌质粒，应加大菌体使用量，使用 300-500 ml 过夜培养物，
最后洗脱液 Buffer EB 60℃水浴预热，吸附和洗脱时可以适当延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。
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