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Cat. Number
HA11501/32119
Chemical Name
HA11501/32119 Cas14a1 Crispr 核酸酶
CAS Number
HA11501/32119
Mol. Weight
64.9 kd
Qty 1
100pmol
Qty 2
1000pmol
Storage condition
组分-20℃储存;≤ 0℃运输。
References

Un1Cas12f1(又名Cas14a)是依赖于crRNA和tracrRNA共同介导的(或融合后的sgRNA单独介导的)DNA核酸内切酶,能特异结合并切割靶标ssDNA,且不受PAM位点的限制。此外,Un1Cas12f1也能以PAM依赖的方式特异地剪切靶标dsDNA,使DNA双链断裂并生成粘性末端。与其他Cas12蛋白类似,Un1Cas12f1蛋白同样拥有针对ssDNA的反式切割活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性),双链或单链DNA靶标均能激活Un1Cas12f1的反式剪切活性,即当Un1Cas12f1蛋白与sgRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后,便会被激活针对非特异序列ssDNA的反式剪切活性,将体系中的任意序列ssDNA切碎。
相比于其他的Cas蛋白,Cas12f1蛋白的分子量普遍较小(400~700AA),其中Un1Cas12f1的分子量约61.5 kD,可用于靶标核酸的分子检测(详细信息请参考PMID: 30337455)。上海惠诚生物优势提供CRISPR基因编辑系列,咨询订购热线:021-60498804


产品组成  

Cas14a1 Nuclease (10 μM) a100 pmol
10 × HOLMES Buffer 11 mL

 a.Un1Cas12f1 Nuclease浓度为10 μM,即10 pmol/μL,100 pmol规格的总体积为10 μL,1,000 pmol规格的总体积为100 μL;


实验流程

  1. 反式剪切实验


    组分体积终浓度
    10 × HOLMES Buffer 1
    2 μL
    1 ×
    10 μM Cas14a1 Nuclease
    0.05~0.5 μL
    25~250 nM
    10 μM sgRNA
    0.05~0.5 μL
    25~250 nM
    10 μM Target DNA
    0.05~0.5 μL
    25~250 nM
    10 μM ssDNA Reporter
    0.05~0.5 μL
    25~250 nM
    Nuclease-free water
    Up to 20 μL

◆ 反式剪切体系中Target DNA可为ssDNA或带PAM序列的dsDNA。

◆ 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整,用量较少时可先将各组分稀释后加入体系,AapCas12b Nuclease可用1×HOLMES Buffer1稀释,稀释后需立即使用(若要稀释后的Cas12酶长期保存,请使用Cas12 Dilution Buffer,#32012),sgRNA、Target DNA及ssDNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释,但极低浓度的Target DNA(例如LOD实验)建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。

◆ 反式剪切体系中探针的用量和预期反应到达平台期的时间可参考各批号Cas酶transU的具体数值,详见本公司提供的COA检测报告。

◆ 实时荧光定量PCR仪检测荧光信号,37℃反应,每30 sec采集一次荧光信号。


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