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CRISPR Cas12a蛋白可以直接横向弛豫时间生物传感器用于沙门氏菌检测
为解决传统检测方式效率低、门槛高、判读滞后的痛点，新一代CRISPR-Cas12a 核酸精准快检技术落地沙门氏菌专项检测场景，结合等温扩增技术，实现快速、高灵敏、高特异、设备轻量化的沙门氏菌全场景检测方案，完美适配食品企业质控、第三方筛查、基层监管、科研筛查等多类需求。
水凝胶溶胶-凝胶转变和CRISPR/Cas 12 a系统的磁弛豫开关（MRS）生物传感器本文中，用磁性纳米颗粒（MNP）表面上的生物素修饰的DNA捕获用链霉亲和素标记的碱性磷酸酶（ALP），其通过酶促反应产生酸性环境以释放Ca 2+并诱导海藻酸盐溶胶转化为水凝胶。相反，沙门氏菌激活了CRISPR/Cas12 a系统的反式切割活性，中断了ALP的捕获和随后的溶胶-凝胶转变。的水凝胶化过程进行调节，用于沙门氏菌检测。CRISPR生物传感器能够灵敏地检测沙门氏菌，检测限为158 CFU/mL。它直接改变水分子的状态，该方法克服了传统MRS传感器依赖MNP间接产生T2信号的缺点，为MRS的应用提供了新的思路食品安全分析技术。
方案1：基于藻酸盐水凝胶的溶胶-凝胶转变的用于沙门氏菌检测的MRS-CRISPR生物传感器的感测原理的示意图。
图1.（A）Cas 12 a蛋白、crRNA、FAM和BHQ-1猝灭剂双重标记的荧光探针（FQ）和提取的DNA。（B）在Ca 2+存在下藻酸盐水凝胶的溶胶-凝胶转变的说明以及藻酸盐溶胶和凝胶的图像。藻酸盐（C）溶胶和（D）凝胶的角频率扫描。（E）用于可行性验证的Cas 12 a蛋白、crRNA和靶标的各种组合的T2应答。“+”表示存在，“-”表示不存在。
图2.（A）测定条件优化的说明。（B）海藻酸钠浓度、（C）AAP浓度和（D）ALP-SA稀释比对ΔT2值的影响。
图3.（A）基于所提出的MRS-CRISPR生物传感器的沙门氏菌检测分析过程的示意图。
（B）ΔT2与鼠伤寒沙门氏菌浓度对数之间的线性相关性（鼠伤寒沙门氏菌浓度分别为3.16 × 102、3.16 × 103、3.16 × 104、1.6 × 105、3.16 × 106和1.6 × 107 CFU/mL）。
（C）通过检测鼠伤寒沙门氏菌和四种非靶向病原菌（包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、B. cereus和S. flexneri。
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