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T4 gene32蛋白在RPA中作用机制
T4 gene32蛋白来源于T4噬菌体，属于单链DNA结合蛋白家族，是T4噬菌体的一种单链DNA结合蛋白，在RPA技术中发挥辅助作用。T4 gene32蛋白具有三个OB折叠结构域，可识别并与单链DNA forma化学键结合，但与双链DNA的结合力较弱。T4 gene32蛋白是RPA技术实现等温扩增的一种辅助因子。它可保护单链DNA,促进引物退火,并与其他关键酶协同作用，提高RPA反应的效率与灵敏度，实现低丰度核酸的快速检测。
规格参数：
RAA冻干颗粒产品：
HP80201 基础型RAA核酸扩增试剂（冻干颗粒）
HP80202 荧光型RAA 核酸扩增试剂（冻干颗粒）
HP80203 基础型RT-RAA核酸扩增试剂（冻干颗粒）
HP80204 荧光型RT-RAA核酸扩增试剂（冻干颗粒）
HP80205 试纸条型RAA核酸扩增试剂（冻干颗粒）
HP80206 试纸条型RT-RAA核酸扩增试剂（冻干颗粒）
RPA原料：
EH04401 DNA重组酶 Recombinase A
EH03201 Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase
EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV
EH04701 核酸外切酶 III Exonuclease III
EH02501 M-MuLV反转录酶 M-MuLV Reverse Transcriptase
EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment
EH04501 重组肌酸激酶(CK) Creatine Kinase
EH03501 T4 UvsX重组酶 T4 UvsX Recombinase
EH03401 T4噬菌体基因32编码蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein
EH03601 T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein
HM0058 重组鼠源RNase抑制剂(40 U/µL) RNase Inhibitor
工作机理:
(1)保护单链DNA
在双链DNA初变性后，T4 gene32蛋白可快速识别并且结合单链DNA，形成稳定的蛋白-DNA复合体，以防止单链DNA的二次结构形成和再次回环。这为后续的引物退火和延伸创造条件。
(2)促进引物退火
T4 gene32蛋白可通过与单链DNA的非特异性结合稳定其构象，使引物更易于与模板退火，这有利于RPA反应的启动。
(3)放置与替换
一旦引物-模板双链体形成并进展到延伸阶段，T4 gene32蛋白被逐渐替换，以露出更多的单链DNA供聚合酶使用。这一替换过程需要消耗一定的能量。
(4)回收利用
在RPA反应结束时，尚未结合的T4 gene32蛋白可被回收利用，这降低了RPA成本,有利于其商业化开发。
作用机制:
T4 gene32蛋白主要通过两种机制发挥作用:
(1)非特异性单链DNA结合
T4 gene32蛋白可快速识别和非特异性地结合单链DNA，以稳定其构象和防止回环。
(2)与其他蛋白的协同作用
T4 gene32蛋白还可与T4 UvsX Recombinase、T4 UvsY蛋白发生相互作用，协同地发挥作用，如促进引物退火和加速替换等，提高RPA反应的效率。
T4 gene32蛋白是RPA技术中主要应用如下:
1. 提高RPA反应效率
T4 gene32蛋白可保护单链DNA，促进引物退火，并与其他关键酶协同作用，这可提高RPA反应的效率和灵敏度，实现更高效的等温扩增。
2. 商业RPA试剂盒
一些商业RPA试剂盒中的单链DNA结合蛋白成分包含T4 gene32蛋白，如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。这可提高试剂盒的性能和灵敏度。
3. 低丰度靶核酸检测
T4 gene32蛋白的作用可提高RPA技术对低丰度DNA/RNA的检测灵敏度，满足某些样本极低浓度下的检测需求。
4. 实现细胞核内检测
T4 gene32蛋白保护的单链DNA更易于T4 UvsX Recombinase识别和结合，这有利于实现RPA对细胞核内DNA和RNA的检测。
5. 病原体低丰度快速检测
联合使用与特定病原体高度同源的引物，T4 gene32蛋白及RPA技术可实现病原体极低丰度的快速检测，应用于某些病原体感染的诊断，如病毒感染的诊断。
6. 微生物快速检测
设计与特定微生物同源的引物，联合T4 gene32蛋白及RPA技术，可实现相关微生物DNA/RNA的快速检测，满足环境监测、食品安全等领域的需求。
7. miRNA快速检测
利用与特定miRNA高度同源的引物，联合T4 gene32蛋白及RPA技术，可实现细胞miRNA的快速灵敏检测，满足miRNA功能研究与开发miRNA生物标记物的需求。
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