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RPA等温扩增技术特征及与PCR优势是什么？
RPA(recombinase polymerase amplification)即重组酶聚合酶扩增技术，在ATP存在条件下，重组酶与引物结合, 形成蛋白-核酸聚合体，并搜索配对目标；当引物寻找到配对DNA模板，ATP水解供应能量，重组酶离开引物，并在DNA聚合酶的作用下合成新DNA链；同时，单链DNA结合蛋白( SSB)同被置换出来的DNA单链进行结合，防止DNA模板再次形成双链。RPA实验能在恒定温度下进行全程实验，没有复杂的操作，对仪器及人员的要求不高，适合基层或现场快速诊断。
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RPA等温扩增原理
1. 复合物A能够在单链上寻找同源序列，并连接成环状分子。
2. 单股DNA结合蛋白可以与单链DNA结合，防止其二级结构形成，并引导聚合酶与模板结合。
3. DNA聚合酶负责在模板上合成新链DNA。
RPA的优势在于其等温反应、快速扩增和鲁棒性，这使其非常适合POCT检测。
RPA具有以下主要特征
1. 等温反应
RPA反应在常温(37-42°C)下进行，不需要热循环设备，这使其可以应用于简易的POC诊断装置中。
2. 快速反应
RPA反应只需要20-40分钟，比PCR快几倍，这可实现病原体 DNA的快速检测。
3. 强大的扩增效率
RPA可以从少量模板DNA复制出109-1011个拷贝，扩增效率高达90%。
4. 高度特异性
RPA使用三个核酸酶(活动的复合体A、单股DNA结合蛋白及DNA聚合酶)实现序列特异性扩增，可检出少至几个拷贝的目标DNA。
5. 鲁棒性
RPA可以在各种样本中直接扩增(不需DNA精制)，对PCR的常见阻碍因素如血清、肉汤等也具有很好的耐受性。
6. 灵活性
RPA可直接从各种原始样本中扩增DNA，也可以与其他技术如磁珠分离等结合，实现样本的预处理。
RPA与PCR相比具有以下主要优势
1. 等温反应
RPA在常温下进行，而PCR需要进行多轮的温度变化循环，需要PCR仪等设备。RPA的等温反应更简单，不需要昂贵设备，这有利于POC检测的应用。
2. 速度更快
RPA反应只需20-40分钟，而PCR通常需要2-3小时。RPA可以实现病原DNA的快速检测，适用于临床急症检测。
3. 更高扩增效率
RPA可以得到109-1011拷贝的扩增产物,扩增效率高达90%,而PCR的扩增效率一般在80-90%之间。
4. 鲁棒性更强
RPA可以直接从各种原始样本扩增，而PCR更加敏感，常需进行DNA精制或分离。RPA对PCR的常见干扰因子也更具耐受性。
5. 不产生二级片段
RPA扩增产物为单一片段,而PCR可能产生二级扩增片段,影响结果的准确性。
RPA也存在一定局限
1. 目前报道较少：与PCR相比，RPA的研究报道和应用案例还比较少，相关技术和产品也较不成熟，有待进一步推广。
2. 专一性较差：RPA的扩增效率高，但其对非靶DNA的扩增也较PCR更明显，这会产生更高的假阳性信号，影响检测精度。
3. 扩增片段较长：RPA获得的扩增片段一般在100-1500bp之间，较PCR获得的产物长，不利于某些下游检测。
4. 定量性较弱：与实时荧光PCR相比，RPA的定量能力较差，不利于获得准确的DNA定量结果。
RPA相比PCR，由于其等温、快速、高效和鲁棒等优势，更适用于简易POCT检测的应用。但其专一性较差、扩增片段较长和定量性较弱等也是不容忽视的局限因素。
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EH04701 核酸外切酶 III Exonuclease III
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EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment
EH04501 重组肌酸激酶(CK) Creatine Kinase
EH03501 T4 UvsX重组酶 T4 UvsX Recombinase
EH03401 T4噬菌体基因32编码蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein
EH03601 T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein
HM0058 重组鼠源RNase抑制剂(40 U/µL) RNase Inhibitor
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