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HTRF(均质时间分辨荧光)是一种免洗技术,用来检测纯液相体系中待测物,是一款高通量药物筛选利器。。它将标准荧光共振能量转移FRET技术与时间分辨荧光TRF测量相结合,消除了短暂的背景荧光。对于夹心试验,使用两种识别感兴趣蛋白质的抗体,其中一种抗体与供体结合,另一种与受体结合。如果2个抗体识别分析物,供体激发时会发出荧光,能量会转移到附近的受体,从而产生特定的受体荧光。供体荧光也被测量,并与受体荧光的比率被应用。


AlphaLISA assay principle



HTRF技术测定如何工作?

HTRF只需要几个步骤:

  1. 将分析物或样品添加到微孔板中;

  2. 添加检测试剂:抗分析物偶联供体和受体偶联抗体;

  3. 孵育2小时(某些化验可达一夜);

  4. 在HTRF兼容或认证的微孔板阅读器上读取该分析。由受体发出的光将与相互作用的水平成比例。

HTRF技术优势:

1.操作简单:空板直接加样;加完即可检测;时间短加样和孵育2h;

2.适合珍贵样本:整个实验体系只需20ul;

3.均相检测:无需包被;免洗 ELISA;省时省力;

4.体系稳定:7天内可随时检测;信号基本不变;

5.数据客观真实:比值处理可有效去除背景荧光;假阳性率和价阴性率低;

6.高端检测:只需简单的酶标仪就可以轻松搞定。


应用:

HTRF已被证明在各种应用中,包括GPCRs,激酶,表观遗传学,PPIs和包括细胞因子在内的广泛生物标志物的量化。

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