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实验室制备的培养基在使用前需要检测。如果购买的是已制成1x工作液的培养基,则除了对培养基的一些特殊要求外,应该依据供应商所执行的质量控制。同样的,如果使用的是10x浓缩液,生长和无菌检测已经做过,而其中唯一的变量是用于稀释的水。假定水的电导率和总有机碳水平的下降在说明书规定的范围内,并且水的供应也没有大的变化,大多数实验室可以接受厂商的承诺以作为最终的质量控制,但还是希望检测一下完全培养基的无菌性。


然而,如果培养基是用干粉配制,则要在实验室进行灭菌,需要进行质量控制以确定真正无菌。同时尽管假定所有组分已溶解,还是要准备进行供应商关于培养基促生长活性的质量控制。由基本分别从瓶中取组分制备的培养基需要进行完整的质量控制,包括无菌检测和培养检测。


本文重点介绍培养基的无菌检测。

1、起泡点

当正压过滤完成,所有液体已通过滤器时,提高泵的压力直至滤器流出物中形成气泡,这就叫起泡点(bubble point),它会在压力是过滤压力的两倍多时出现。如果滤器在灭菌压力(100kPa)或更低压力时出现起泡,那么它已经穿孔,应该丢弃。在这种情况下进行,任何已经收集的滤出液都应该被认为是未灭菌的,需要重新过滤。专用的、一次性的滤器极少有不能通过起泡点测试的,这种测试是很容易且很快可以完成的。可重复使用的滤器会通不过这种测试,因此需要在每次过滤后进行检测。

2、下游二次过滤

在主灭菌过滤器的下游放置一个可拆卸的0.45um的滤器。任何由于第一个滤器的失效而通过的污染,将会被第二个滤器除去。过滤结束后,取下第二个滤器的滤膜并放置在营养琼脂上。如有菌落出现,则应丢弃或重新过滤培养基。这种方法具有监测所有滤出液的优点,而不只是其中一部分,虽然它同样也不能避免在装瓶和封口过程中被污染的风险。

3、温育

在过滤的开始、中间和结束时取样,如果瓶子小,可以直接用瓶子;如果瓶子大,为不浪费培养基,可以在过滤时将样品取出收集到较小的容器中。然而,请记住,如果每瓶装1000mL,则取1mL样品会使敏感度降低1000倍;如果不准备牺牲这整瓶的培养基,则至少应取出100mL作为样品。最好不要从每一个瓶子中取样,因为这样做增加了这些瓶子污染的危险;取样时降低瓶中体积,从而改变了随后加入此瓶的附加物的稀释度。较好的做法是在过滤过程中,每隔一段时间收集少量的样品用于检测。

样品培养可以根据下面两种程序之一进行。

(1)37℃培养一周。任何一一个样品变混浊,应丢弃样品并将这批培养基重新灭菌。如果其他储存的瓶子中也出现被污染的标志,则整批培养基都应丢弃。

(2)为了更全面的检测,同时,当要过滤的液体本身不具有营养物时,可像本节描述的那样,取样,每个按1/3稀释到营养肉汤中(例如,胰蛋白酶大豆培养基、硫代乙醇酸盐和 Sabourard’s培养基)。每个样品分成两份,一份在35~37℃培养10天,另一份在20-26℃培养10天,同时设立非接种的对照。如果样品培养后有疑问,将它们混合后等分,接种于营养琼脂上并在35~37℃和20~26℃温育。

4、高压蒸汽灭菌的溶液

假定在高压蒸汽锅的中心部位已进行了相应监测(灭菌温度和时间),那么对高压蒸汽灭菌的物品进行无菌检测就没有多大必要。

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