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号外!号外!磁珠法24孔质粒DNA小量抽提试剂盒(90-96mL)免费送样了!

【货号】

HA31016


【产品名称】

磁珠法24孔质粒DNA小量抽提试剂盒(90-96mL)


【规格】

24深孔板


【产品描述】

本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力,当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA,从而达到分离纯化质粒DNA的效果。整个操作过程简便、快速。本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质,保证提取所得质粒DNA的纯度,所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。

本试剂盒可在EP管中进行手动法操作,或者与自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。


【试剂盒组成】

组分

规格

①  P1 buffer

8mL

②  P2 buffer

8mL

③  P3 buffer

11mL

④  磁珠混悬液

5mL

⑤  Binding buffer

16.25mL

⑥  Wash buffer

10mL

⑦  RNase A酶溶液

2uL


【贮存条件】

组分①-⑥于2~8℃保存;组分⑦于-20℃保存;其他组分室温保存;


【实验步骤】

一、试剂准备

1. 将组分⑦RNase A酶溶液取出1.6uL加入组分①P1 buffer中,混匀,放置4℃保存备用;

2. 在组分⑤Binding buffer中加入9.75mL无水乙醇,混匀,室温保存备用;

3. 在组分⑥Wash buffer中加入40mL无水乙醇,混匀,室温保存备用。

二、操作步骤

1.  样品准备

a) 在24深孔板里过夜培养的4mL菌液,在离心机的水平转子上4000rpm离心15min,尽弃上清。

     注意:孔之间不要污染。

b) 将300μL P1 Buffer加入24深孔板离心过后的菌体中,将24深孔板放置实验桌上,贴着桌面左右晃动,菌体充分悬浮。

     注意:使用前请添加RNase 到P1 Buffer和在悬浮菌体时液体不要溅出杜绝污染。

c)  加300μL P2 Buffer到已悬浮好的菌液中,左右缓慢摇动混合均匀(不能剧烈震荡),进行裂解。

     注意:操作时间不能超过5min(防止基因组污染)。

d) 再向裂解体系中加入420μL P3 Buffer,左右缓慢摇动混合均匀(不能剧烈震荡),出现絮状物沉淀。

e) 将裂解后的24深孔板放置在离心机的水平转子上4000rpm离心20min。

f) 取出离心后的24深孔板,一一对应的转移840uL上清至24 深孔板中。

     注意:在转移过程中杜绝出现污染,样品并做好标记。

2. 质粒抽提

a) 准备清洗24孔深孔板,添加2 mL的Washbuffer(已添加乙醇)至新的24孔深孔板。

b) 准备洗脱24孔深孔板,添加100uL的无菌水至新的24孔深孔板。

c) 添加200uL磁珠混悬液至上述24深孔板中,完成后再加入1040uL的Binding buffer(已添加乙醇)至24孔深孔板中。

    注意:添加磁珠前混匀磁珠混悬液。

d) 放置24孔磁力套至1号板位的24孔深孔板上,2号板位放置含有样品和磁珠24孔深孔板,3号和4号板位放置含有Wash buffer的24孔深孔板,5号板位放置100uL的超纯水的24孔深孔板。

e) 运行质粒抽提仪器,进入质粒抽提专用程序,运行完成后用移液器将样品转移至全裙边的96PCR板里,转移完成后标记项目号和质粒信息。

f) 使用分光光度计检测A260,并进行定量,测定的浓度记录于96PCR板上并登记excel表。


【注意事项】

1.  试剂时间长可能会出现沉淀,使用前轻轻摇晃混合均匀。也可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.  磁珠使用前充分摇匀。RNase保存在-20℃。试剂盒其他成分置于常温保存。

3.  Buffer P1加入后一定要充分悬浮细菌,要保证看不到结块的菌,否则细菌不易被裂解,质粒产量会显著下降。

4.  Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴(37℃)加热溶解,混匀后使用。

5.  基因组污染:Buffer P2和P3加入后轻轻摇晃,防止基因组断裂。


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