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/ Products Classification 点击展开+磁珠法质粒DNA大量抽提试剂盒(90-100mL)
【货号】
HA31015
【产品名称】
磁珠法质粒DNA大量抽提试剂盒 (90-100mL)
【规格】
2次
【产品描述】
本试剂盒可应用于对大量菌液进行质粒DNA抽提。试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果。整个操作过程简便、快速。本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度，所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。
推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为50ml，低拷贝质粒推荐使用量为100ml。
本试剂盒可在EP管中进行手动法操作，或者与自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。
【试剂盒组成】
组分 | 规格 |
① P1 buffer | 100mL |
② P2 buffer | 100mL |
③ P3 buffer | 140mL |
④ 磁珠混悬液 | 60mL |
⑤ Binding buffer | 225mL |
⑥ Wash buffer | 128mL |
⑦ RNase A酶溶液 | 5uL |
【贮存条件】
组分①-⑥于2～8℃保存；组分⑦于-20℃保存。 |
【实验步骤】
一、试剂准备
1、 将组分⑦RNase A酶溶液取出2uL加入组分①P1 buffer中，混匀，放置4℃保存备用；
2、 在组分⑤Binding buffer中加入135mL无水乙醇，混匀，室温保存备用；
3、 在组分⑥Wash buffer中加入512mL无水乙醇，混匀，室温保存备用。
二、操作步骤
1. 样品准备
a) 过夜培养的菌液，转移至50 mL离心管，在离心机的水平转子上4000 rpm离心10 min，尽弃上清。
b) 将5 mL P1 Buffer（已加入RNaseA酶溶液）加入至50 mL离心管，菌体充分悬浮。
c) 加5 mL P2 Buffer到已悬浮好的菌液中，缓慢摇动混合均匀（不能剧烈震荡），进行裂解。操作时间不能超过5min，防止基因组污染。
d) 再向裂解体系中加入7 mL P3 Buffer，缓慢摇动混合均匀（不能剧烈震荡），出现絮状物沉淀。
e) 将中和后的50 mL离心管在离心机的水平转子上4000 rpm离心20 min。
f) 取出离心后的50 mL离心管，转移14 mL上清至新的50 mL离心管中。
2. 质粒抽提
a) 添加2.5 mL磁珠至上述新的50 mL离心管中，完成后再加入16.5 mL的Binding buffer（已加无水乙醇）至新的50 mL离心管中。
b) 放置旋转架上，孵育10 min。
c) 放置磁力架上，静置1-2 min，尽弃上清。
d) 加入30 mL Wash buffer（已加无水乙醇）至新的50 mL离心管中，放置旋转架上，孵育1 min。重复一次。
e) 放置磁力架上，静置1-2 min，尽弃上清。
f) 放置37℃培养箱 10 min，直到磁珠中酒精蒸发完全。
g) 加入500-1mL无菌水溶解，孵育3-5 min。
h) 放置磁力架上，静置1-2 min，转移上清之EP管中。
i) 使用分光光度计检测A260。
【注意事项】
1. 试剂时间长可能会出现沉淀，使用前轻轻摇晃混合均匀。也可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2. 磁珠使用前充分摇匀。RNase保存在-20℃。试剂盒其他成分置于常温保存。
3. Buffer P1加入后一定要充分悬浮细菌，要保证看不到结块的菌，否则细菌不易被裂解，质粒产量会显著下降。
4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴（37℃）加热溶解，混匀后使用。
5. 基因组污染：Buffer P2和P3加入后轻轻摇晃，防止基因组断裂。
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